2010 Fiscal Year Annual Research Report
ペプチド修飾リポソームと超音波技術との融合による骨髄幹細胞への遺伝子導入法の開発
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22650119
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| Research Institution | Tokyo University of Pharmacy and Life Science |
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Principal Investigator |
根岸 洋一 東京薬科大学, 薬学部, 准教授 (50286978)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
新槙 幸彦 東京薬科大学, 薬学部, 教授 (90138959)
高橋 葉子 (遠藤 葉子) 東京薬科大学, 薬学部, 助手 (30453806)
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| Keywords | 超音波 / 遺伝子細胞療法 / リポソーム |
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| Research Abstract |
1) ペプチド修飾リポソームの調製
AG73ペプチドをPEGの末端に結合させたペプチド修飾リポソームを調製した。脂質には、負電荷脂質DOPGとDOPEを用い、また、蛍光標識には、DiIを使用した。蛍光標識された種々のリポソームを骨髄幹細胞に添加し、その細胞相互作用を蛍光顕微鏡にて調べた。その結果、AG73ペプチド修飾リポソームでは、比較的強い細胞相互作用が認められたのに対し、スクランブルペプチド(AG73T)を修飾したリポソームやペプチド未修飾リポソームの場合においては、ほとんど相互作用は認められなかった。このことから、AG73ペプチド修飾リポソームの骨髄幹細胞への遺伝子キャリアーとしての可能性が示唆された。
2) 骨髄幹細胞におけるシンデカンの発現解析
ラミニン由来ペプチドAG73のレセプターとして考えられているシンデカン2が、骨髄幹細胞に発現しているかを確認するために抗シンデカン2抗体を用いて、フローサイトメトリー(FACS)により解析した。その結果、中程度のシンデカン2発現が認められた。このことから、AG73ペプチド修飾リポソームは、シンデカン2を介して骨髄幹細胞と相互作用することが示された。
3) 遺伝子導入効果のin vitro評価
上記の結果を踏まえて、AG73ペプチド修飾リポソームにpoly-L-1ysineを用いてレポーター遺伝子をコードした発現プラスミド(レポーター遺伝子(EGFPまたは、ルシフェラーゼ)の内封を行い、これを用いて遺伝子導入を試みた。その結果、細胞内への取り込みは、確認できたものの有意な遺伝子発現の増強は認められなかった。このことは、細胞内に取り込まれたリポソームのエンドソームから、脱出に問題があると考えられる。今後は、導入リポソームのエンドソームからの脱出を促進させる工夫(超音波併用や脂質等の変更)を進める必要があると考えられる。
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Research Products
(1 results)
