培養細胞とキメラ分子を用いたタンパク質のアトグラム検出システムの開発に関する研究

2010 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 22659027
• Research Institution: National Institute of Health Sciences
• Principal Investigator: 中村 亮介 国立医薬品食品衛生研究所, 代謝生化学部, 主任研究官 (50333357)
• Keywords: 高感度測定 / IgE受容体 / キメラ分子 / 遺伝子組換え作物 / ルシフェラーゼ

Research Abstract

遺伝子組換え(GM)作物の混入試験や牛肉中のプリオンタンパク質の検出など、タンパク質の超高感度測定技術は、国民の食の安心・安全確保に大きく貢献している。通常、タンパク質の超高感度測定はウェスタンブロットが広く用いられているが、この方法はSDS等の強い界面活性剤で変性させたタンパク質を対象とするものであり、溶液中のネイティブなタンパク質の検出や、食品の加工等に伴う抗原性(アレルゲン性)の変化の検出などには必ずしも適さないことが知られている。
本研究は、申請者が独自に開発したアレルギー試験法「EXiLE法」の超高感度測定技術に立脚し、アレルギーに重要なIgE抗体ではなく、より汎用的な抗体であるIgG抗体を用いて抗原タンパク質を定量できるよう改変し、アトグラム(10^<-18>g)オーダーの超高感度測定システムの開発を目指す。
本年度は、ラットの高親和性IgE受容体(FcεRI)のIgE結合サブユニット(α鎖)と、広汎な動物種由来IgGと強固な結合性を有するProtein G(Streptococcus dysgalactiae subsp.equisimilis G148由来)とのキメラ分子を作製するため、人工遺伝子合成技術を利用して、417bpからなるキメラcDNA遺伝子を化学合成し、pIDTSMARTベクターに挿入した。また、本法により測定できるようになることが期待される、加工に伴う食品中の変性タンパク質のモデルとして、鶏卵由来オボアルブミンおよびオボムコイドを用い、加熱および酵素消化による抗原の変性および抗体との反応性の変化について解析を行なった。

Research Products

• [Journal Article] Allergenicity study of EGFP-transgenic chicken meat by serological and 2D-DIGE analysis. (2010)
  • Author(s): Nakamura, R., Nakamura, R., Nakano, M., Arisawa, K., Ezaki, R., Horiuchi, H., Teshima, R.
  • Journal Title: Food and Chemical Toxicology Volume: 48 Pages: 1302-1310
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Immunoproteomic and 2D-DIGE analysis of Arabidopsis DREB1A-trans-genic potato. (2010)
  • Author(s): Nakamura, R., Satoh, R., Nakamura, R., Shimazaki, T., Kasuga, M., YamaguchiI-Shinozaki, K., Kikuchi, A., Watanabe, K.N., Teshima, R.
  • Journal Title: Biological & Pharmaceutical Bulletin Volume: 33 Pages: 1418-1425
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Effects of propolis from different areas on mast cell degranulation and identification of the effective components in propolis. (2010)
  • Author(s): Nakamura, R., Nakamura R., Watanabe, K., Oka, K., Ohta, S., Mishima, S., Teshima, R.
  • Journal Title: International Immunopharmacology Volume: 10 Pages: 1107-1112
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A convenient and sensitive allergy test : IgE crosslinking-induced luciferase expression in cultured mast cells. (2010)
  • Author(s): Nakamura, R., Uchida, Y., Higuchi, M., Nakamura, R., Tsuge, I., Urisu, A., Teshima, R.
  • Journal Title: Allergy Volume: 65 Pages: 1266-1273
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] アレルギー試験法 (2010)
  • Author(s): 中村亮介
  • Journal Title: ぶんせき Volume: 10 Pages: 506-509
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 食品中のアレルゲンの予測 (2010)
  • Author(s): 手島玲子, 中村亮介
  • Journal Title: 食品衛生学雑誌 Volume: 52 Pages: 1-9
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 新しいアレルギー試験法EXiLE法による加熱卵白アレルゲンのIgE応答性の解析 (2011)
  • Author(s): 中村亮介, 石渡亜耶乃, 樋口雅一, 中村里香, 川上浩, 手島玲子
  • Organizer: 日本薬学会第131年会
  • Place of Presentation: ツインメッセ静岡(静岡)
  • Year and Date: 2011-03-29
• [Presentation] 甲殻類アレルギー患者血清中IgE抗体による培養マスト細胞活性化試験 (2010)
  • Author(s): 中村亮介, 石渡亜耶乃, 酒井信夫, 中村厚, 穐山浩, 安達玲子, 川上浩, 手島玲子
  • Organizer: BMB 2010
  • Place of Presentation: ポートアイランド(神戸)
  • Year and Date: 2010-12-09
• [Presentation] 培養細胞を用いた新規アレルギー試験法の開発 (2010)
  • Author(s): 中村亮介, 樋口雅一, 内田好海, 中村里香, 柘植郁哉, 宇理須厚雄, 手島玲子
  • Organizer: 第60回日本アレルギー学会秋季学術大会
  • Place of Presentation: 東京国際フォーラム(東京)
  • Year and Date: 2010-11-25
• [Presentation] EXiLE法を用いたアレルゲン交差反応性の解析 (2010)
  • Author(s): 中村亮介, 樋口雅一, 中村里香, 近藤康人, 宇理須厚雄, 手島玲子
  • Organizer: 第17回日本免疫毒性学会学術大会
  • Place of Presentation: 国立環境研(つくば)
  • Year and Date: 2010-09-10
• [Presentation] IgE crosslinking-induced luciferase expression (EXiLE) as a sensitive in dicator for serum-based allergy test (2010)
  • Author(s): Nakamura, R., Uchida, Y., Higuchi, M., Nakamura, R., Teshima, R.
  • Organizer: EAACT2010
  • Place of Presentation: ExCeL London(ロンドン)
  • Year and Date: 2010-06-07