2010 Fiscal Year Annual Research Report
変形性膝関節症の病因解明と治療を目指した軟骨肥大分化誘導因子の網羅的解析
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22659266
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
武冨 修治 東京大学, 医学部附属病院, 特任臨床医 (70570018)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
竹下 克志 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (30262009)
中川 匠 東京大学, 医学部附属病院, 講師 (90338385)
増田 和浩 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (70407948)
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| Keywords | 関節病学 / 変形性膝関節症 |
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| Research Abstract |
肥大軟骨分化モニタリングシステムの確立のため、代表的な肥大分化マーカーであるX型コラーゲン、VEGFおよびMMP13遺伝子のプロモーター解析を行い、それぞれの転写開始点上流1kbから下流1kbの間に存在するコアエンハンサーを複数同定した。これらのコアエンハンサーをタンデムにつなぎ、さらに転写開始点付近のベーサルプロモイターとをつなぎ、下流に各種蛍光蛋白を接合したレポーターコンストラクトを作成した。これらのレポーターカセットをレンチウイルスベースに組み替え、軟骨細胞前駆細胞株ATDC5にレンチウイルスベクターによって安定導入し、薬剤セレクションによってクローンを選択し、さらにそれぞれATDC5の分化に従って蛍光を良好に発色するクローンを樹立した。まずX型コラーゲンのコアエンハンサーを用いた細胞システムにヒト軟骨やマウス胚を起源とするcDNAから作成したレトロウィルスライブラリーを導入し、発現クローニングを行い、現在までに複数の陽性クローンを得ている。現在はその細胞にとりこまれたトランスジーンをシークエンスで確認中であり、今後肥大分化誘導候補遺伝子として軟骨組織での発現解析を行い、さらに軟骨細胞における機能解析を予定している。まだ同様にVEGFおよびMMP13遺伝子のコアエンハンサーを用いた細胞システムを用いて、同様のスクリーング実験を行っており、陽性クローンが得られ次第同様の解析を行う。
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