2010 Fiscal Year Annual Research Report
HuRの核外輸送を指標とした口腔がん悪性度診断の基礎検討
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22659360
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
戸塚 靖則 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 教授 (00109456)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
進藤 正信 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 教授 (20162802)
東野 史裕 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 准教授 (50301891)
樋田 京子 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 特任准教授 (40399952)
北村 哲也 北海道大学, 大学院・歯学研究科, 助教 (00451451)
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| Keywords | 口腔がん / AU-rich element / ARE-mRNA / HuR |
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| Research Abstract |
本研究の目的は、口腔がんにおけるHuRの局在、細胞質におけるHuR量と悪性度との関連、ならびに白板症におけるHuRの局在と癌化の関連を調べ、それらの関係を明らかにすることである。具体的には、悪性度の異なる口腔がん細胞を用いてHuRの局在を検索し、またこれまでに治療した白板症の標本におけるHuRの局在を検討し、HuRの局在と口腔がんの悪性度ならびに白板症の臨床経過との関連を明らかにする。
1)HuRタンパクの細胞内局在
口腔がん細胞のHSC-3、Ca9-22、正常細胞のHGF (human gingival fibrobrast)、PDL (periodontal ligament)を用いて、免疫染色法によりHuRの局在を検討したところ、正常細胞ではHuRが核に限局して存在しているのに対し、がん細胞ではHuRが細胞質にも存在することが明らかになった。
2)ARE-mRNAの細胞内局在
1)と同様の細胞を用いて、in situ hybridization法によりc-fosなどのARE-mRNAの局在を確認したところ、HuR同様、がん細胞ではARE-mRNAが細胞質にも存在することが明らかになった。さらに、各細胞を核と細胞質に分離してARE-mRNAの定量を行ったところ、がん細胞ではARE-mRNAが細胞質に多く存在していた。
現在、口腔がん組織及び白板症組織を用いて1)2)と同様の検討を準備中である。
3)RNA結合タンパクのノックダウン
口腔がん細胞において、HuRをノックダウンさせることにより、c-fosなどのARE-mRNAの核外輸送や安定化が阻害され、さらに細胞の性質が変化すること、特に足場非依存性の増殖能が低下することを解明し、それらの結果をMolecular Cancer Researchに掲載した。
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