2011 Fiscal Year Annual Research Report
Wntシグナルを制御するリン酸化酵素の探索とその機能解析
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22770127
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
佐藤 朗 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (70464302)
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| Keywords | Wntシグナル / Wnt5a / Dishevelled(Dvl) / リン酸化酵素 |
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| Research Abstract |
Wntによって活性化される複数のシグナル伝達経路は、主として細胞の分化・増殖を制御するβ-カテニン経路と細胞運動・極性を制御するβ-カテニン非依存性経路に大別される。両経路で機能する細胞内因子Dvlにはリン酸化される可能性の高いセリン、スレオニン、チロシンが多く存在し、実際に幾つかの細胞株においてWntで刺激をすると内在性のDvlのリン酸化が観察される。しかし、現在までに両経路におけるDvlのリン酸化制御やリン酸化の意義に関する知見は乏しい。HeLaS3細胞はWnt5aを高発現しており、siRNAを用いてWnt5aやその受容体であるFz2、Ror1/2をノックダウンすると、そのリン酸化が減弱する。つまり、HeLaS3細胞におけるDvlのリン酸化は、内在性Wnt5aが関与するシグナル経路の活性化による。そこで、ヒトの710種類のリン酸化酵素を網羅したsiRNAlibraryを用いてHeLaS3細胞におけるWnt5aシグナル依存性Dvlのリン酸化に関与するリン酸化酵素の一次スクリーニングを行い、32種のリン酸化酵素を同定した。これらの候補め中には、これまでにDvlのリン酸化に関与すると報告されているCKIδやRor2も含まれているため、スクリーニングは機能していたと考えられた。次に、siRNAを導入後Wnt5aで刺激しても依然としてDvlのリン酸化が減弱したままの候補を選別しようと試みた。しかし、Wnt5aシグナル下流で機能する決定的なリン酸化酵素の同定には至らなかった。受容体Fz2のノックダウンでは、Wnt5a刺激を行ってもDvlのリン酸化は減弱したままであることから、Fz2下流で複数のリン酸化酵素が作用しDvlのリン酸化を引き起しているものと考えられた。
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