2011 Fiscal Year Annual Research Report
内在性小分子esiRNA機能にかかわる核内外輸送機構の役割
| Project/Area Number |
22770174
|
|---|
| Research Institution | Keio University |
|---|
Principal Investigator |
三好 啓太 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (20423395)
|
|---|
| Keywords | RNAサイレンシング / RNAi / Dicer / Argonaute / 細胞内輸送 / RNA-タンパク質複合体 |
|---|
| Research Abstract |
ショウジョウバエ内在性siRNA(esiRNA)は主にトランスポゾンを由来とする小分子RNAである。Argonaute蛋白質AGO2と活性複合体esiRISCを形成し、配列依存的に、おもにトランスポゾンの発現抑制を行う。esiRNA生合成には、二本鎖RNA切断酵素Dcr-2とその結合因子であるLoqs-PDおよびR2D2が必須である。しかし、esiRNA生合成に関して、esiRNA前駆体や細胞内挙動、esiRNAがAGO2へ受け渡されるまでの詳細な分子メカニズムは不明な点が多い。
本研究では、Dcr-2に焦点を当て、細胞内局在やその局在の意味の解明を目的とした。Dcr-2-Loqs-PD複合体はesiRNA前駆体のプロセシングに必須である。抗Loqs-PD抗体を作成した。本抗体を用いたLoqs-PD免疫沈降物に含まれるRNAを解析したところ、成熟esiRNAを含む長鎖RNAが含まれていた。本解析は未知のesiRNA前駆体同定を可能にすると期待できる。これまでに、S2培養細胞内で、Dcr-2およびR2D2は新規細胞質穎粒体(D2-body)を形成することを明らかにした。今回、Dcr-2およびR2D2変異体を作成し、D2-body形成必須領域の同定とその機能との関連を解析した。その結果、D2-body形成はesiRNA依存的であると示唆された。R2D2欠失細胞(D2-body欠失)では、esiRNAは合成されるが、AGO2へ結合するだけでなく、誤ってAGO1(microRNA機構特異的に機能するArgonaute蛋白質)にも結合する。そこで、D2-bodyがesiRNAのAGO2への正確な受け渡しを保証する場であると言える。R2D2のD2-body局在必須領域のみで、正確なAGO2への受け渡しが可能か検証を試みている。
|
-
[Journal Article] Chromatin-associated RNA interference components contribute to transcriptional regulation in Drosophila2011
Author(s)
Cernilogar, F. M., Onorati, M. C., Kothe, G. O., Burroughs, A. M., Parsi, K. M., Breiling, A., Sardo, F. L., Saxena, A., Miyoshi, K., Siomi, H., Siomi, M. C., Carninci, P., Gilmour D. S., Corona D. F. V., and Orlando, V.
-
Journal Title
Nature
Volume: 480
Pages: 391-395
Peer Reviewed
-
-
-
-
-
-
-
