2011 Fiscal Year Annual Research Report
効率的な遺伝子発現抑制技術を利用した担子菌類の遺伝子解析手法の確立
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22780149
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| Research Institution | 公益財団法人岩手生物工学研究センター |
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Principal Investigator |
坂本 裕一 財団法人岩手生物工学研究センター, 生物資源研究部, 主任研究員 (80390889)
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| Keywords | 遺伝子破壊 / シイタケ / 担子菌類 / 食用きのこ |
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| Research Abstract |
担子菌類において、効率的な遺伝子組換え技術を確立することを目的として、研究を進めている。特に、DelsGate法による遺伝子破壊技術と、Cre-loxP法によるマーカー遺伝子回収技術を目指している。昨年度までに、シイタケにおいてDelsGate法により、遺伝子破壊ベクターを効率的に作出する技術は完成した。
今年度は、昨年度作出したlcc1遺伝子破壊ベクターを用いて、遺伝子破壊の条件検討を行ったが、残念ながら、これまで遺伝子破壊株が得られていない。そこで、今年度は新たな遺伝子破壊用遺伝子のクローニングを行った。その結果、子実体発生を負に制御しているpcc1遺伝子と、非相同組換えに関わるku80遺伝子のクローニングに成功した。pcc1遺伝子に関しては、子実体形成能力を持つ、二核菌糸体で発現が低いことが確認された。現在は、これらの遺伝子に関して、Dels Gate法を用いて、遺伝子破壊ベクターを作出しているところである。
シイタケにおいて、遺伝子破壊の条件検討を進めるには、非常に時間がかかることから、ウシグソヒトヨタケを用いて、Cre-loxP法が可能かどうかを検証することとした。ウシグソヒトヨタケにおいては、既にKu70破壊株と、ハイグロマイシン耐性マーカーによる遺伝子破壊技術が確立されている。そこで、ウシグソヒトヨタケ遺伝子破壊ベクターに、loxP配列を組み込んだ。得られたベクターは、ハイグロマイシン耐性マーカー両端にloxP配列が組み込まれ、容易に任意の遺伝子の破壊ベクターが構築できるデザインとした。現在は、得られたベクターを用いて、Creレコンビナーゼによりハイグロマイシン耐性マーカー遺伝子が回収できるかをためしているところである。
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