2010 Fiscal Year Annual Research Report
M細胞の細胞内粒子透過能をもたらす遺伝子の発現クローニング
| Project/Area Number |
22790343
|
|---|
| Research Institution | Shinshu University |
|---|
Principal Investigator |
小林 基弘 信州大学, 医学系研究科, 講師 (00362137)
|
|---|
| Keywords | M細胞 / 発現クローニング |
|---|
| Research Abstract |
研究課題全体では,ヒトM細胞のin vitroモデルであるCaco-2細胞-Raji細胞共培養系を用いて,Caco-2細胞をM細胞に分化させ,M細胞の最も重要な機能である細胞内粒子透過能もたらす遺伝子を発現クローニングによって単離同定することを目標としている.平成22年度は,Caco-2細胞-Raji細胞共培養系の確立と,cDNAライブラリーの作製を行うことを目標としている.Transwell insertを用いたCaco-2細胞-Raji細胞共培養系では,これまでの論文(Gullberg et al., Biochem Biophys Res Commun 279:808-813, 2000)に述べられている程,M細胞への分化誘導はかからず,現在も至適条件の検討を続けている.一方,cDNAライブラリー作製に関しては,Transwell insertを用いた培養では十分量のtotal RNAが回収できないため,通常の径10cmのディッシュを用いてCaco-2細胞-Raji細胞共培養を行い,total RNAを回収し,pBApo-CMV発現ベクターにサブクローニングされたcDNAライブラリーの作製をタカラバイオに委託した.最終的には1x10^7タイターの良質なcDNAライブラリーが完成した.現在,このcDNAライブラリーをCaco-2細胞に遺伝子導入し,細胞内粒子透過能をもたらす遺伝子のスクリーニングをする準備に入ったところである.
|
