表皮増殖性皮膚疾患の病態における核移行シグナルの役割解明

2011 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 22791070
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 梅垣 知子 大阪大学, 医学系研究科, 助教 (80397629)
• Keywords: 核移行シグナル / karyopherin α / 増殖 / TAP methods / LC/MS/MS

Research Abstract

これまでの研究結果により、KPNA2が乾癬において基底層付近で発現が上昇しており、有棘細胞癌や悪性黒色腫などの皮膚悪性腫瘍においてもKPNA2の発現上昇が確認された。そこで細胞増殖に関して核移行シグナル(KPNA2)が何らかの役割を果たしている可能性があると考えた。過去の報告では卵巣癌や食道癌などでもKPNA2は発現増加しているが、悪性腫瘍におけるKPNA2の役割はまだ不明であり、si KPNA2でノックダウンしてもその増殖は抑制されなかったとの報告がある。そこで、培養HaCaT細胞にsi KPNA2を導入してその細胞増殖に関してMTSアッセイを用いて行ったが、si controlと比較して増殖に有意な差が見られなかった。しかし、si KPNAの各サブユニットを複合して同時に導入し、また、低栄養や低酸素などの刺激を加えた条件で比較検討すると、MTSアッセイにて有意に増殖が抑制されることが明らかになった。この増殖抑制のメカニズムをさらに詳細に調べるため、FACSを用いて、各条件下での細胞周期の変化を検討した。
また、細胞増殖が活性化している状態において、どのような転写因子がKPNA2の働きによって実際に核へ移行し増殖を維持させているのかについて、細胞内でのタンパク結合を解析することから明らかにするため、TAP(tandem affinity purification)methodを用いてHaCaT細胞内でKPNA2と結合するタンパクを分離・精製した。HaCaT細胞におけるstably expressing KPNA2 with a C-terminal TAP-epitope tag(KPNA2-TAP)の作成を行い、これらを細胞数1×10^8培養しTAP methodを用いてKPNA2と結合するタンパクを細胞質分画と核分画に分けて回収し、それぞれをSDS-PAGEで展開した後銀染色を行い、特異的結合と考えられるバンドを切り出し、mass spectrometryを行いターゲットタンパクを同定した。同定タンパクの解析をさらに追加して行った。これらの結果を元に、皮膚科領域における乾癬や皮膚悪性腫瘍の増殖に関する詳細なメカニズムが明らかになっていくと考えた。

Research Products

• [Journal Article] Hereditary angioedema in Japan : Genetic analysis of 13 unrelated cases (2012)
  • Author(s): Yamamoto T, Horiuchi T, Miyahara H, Yoshizawa S, Maehara J, Shono E, Takamura K, Machida H, Tsujioka K, Kaneko T, Uemura N, Suzawa K, , Inagaki N, Umegaki N, Kasamatsu Y, Hara A, Arinobu Y, Inoue Y, Niiro H, Kashiwagai Y, Harashima S, Tahira T, Tsukamoto
  • Journal Title: The American Journal of the Medical Sciences Volume: 343(3) Pages: 210-4
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] The course of Pregnancy and childbirth in three mothers with recessive dystrophic epidermolysis bullosa (2012)
  • Author(s): Hanafusa T, Tamai K, Umegaki N, Yamaguchi Y, Fukuda S, Nishikawa Y, Yaegashi N, Okuyama R, McGrath JA, Katayama I
  • Journal Title: Clin Exp Dermatol Volume: 37(1) Pages: 10-4
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Vorner type palmoplantar keratoderma : novel KRT9 mutation associated with knuckle pad-like lesion and recurrent mutation causing digital mutilation (2011)
  • Author(s): Umegaki N, Nakano H, Tamai K, Mitsuhashi Y, Akasaka E, Sawamura D, Katayama I
  • Journal Title: Br J Dermatol Volume: 165(1) Pages: 199-201
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A case of bullous pemphigoid exacerbated by irradiation after breast conservative radiotherapy (2011)
  • Author(s): Isohashi F, Konishi K, Umegaki N, Tanei T, Koizumi M, Yoshioka Y
  • Journal Title: Jpn J Clin Oncol Volume: 41(6) Pages: 811-3
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Four Cases of Atopic Dermatitis Complicated by Sjogren's Syndrome : Link between Dry Skin and Autoimmune Anhidrosis (2011)
  • Author(s): Kitaba S, Matsui S, Iimuro E, Nishioka M, Kijima A, Umegaki N, Murota H, Katayama I
  • Journal Title: Allergol Int Volume: 60(3) Pages: 387-91
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] PDGFRalpha-positive cells in bone marrow are mobilized by high mobility group box 1 (HMGB1)to regenerate injured epithelia (2011)
  • Author(s): Tamai K, Yamazaki T, Chino T, Ishii M, Otsuru S, Kikuchi Y, Iinuma S, Saga K, Nimura K, Shimbo T, Umegaki N, Katayama I, Miyazaki J, Takeda J, McGrath JA, Uitto J, Kaneda Y
  • Journal Title: Proc Natl Acad Sci Volume: 108(16) Pages: 6609-14
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Clinical implications of leukocytapheresis using a centrifugal cell separator for steroid-resistant pyoderma gangrenosum associated with inf lammatory bowel disease (2011)
  • Author(s): Hanafusa T, Azukizawa H, Umegaki N, Tani M, Yamaguchi Y, Katayama I
  • Journal Title: J Dermatol Volume: 38(5) Pages: 507-510
  • Peer Reviewed