2012 Fiscal Year Annual Research Report
頭頸部癌細胞におけるマイクロＲＮＡ活性化機序の解明
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22791561
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
加納 里志 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (00374421)
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| Project Period (FY) |
2010-04-01 – 2013-03-31
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| Keywords | 頭頸部癌 / マイクロRNA / TRIM32 |
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| Research Abstract |
頭頸部癌細胞を用いて，TRIM32に特異的に結合するマイクロRNAを網羅的に同定し，そのマイクロRNAがTRIM32によって活性化されているかを解析し，また，同定されたマイクロRNAのターゲット遺伝子を同定して，それらマイクロRNAとターゲット遺伝子が実際の臨床検体ではどのように発現し，さらに，その臨床データと相関するかを検討することを目的に，研究を行った。
細胞内にマイクロRNAとTRIM32を形質導入することで，細胞の機能変化（腫瘍増殖，アポトーシスなど）を検討.また哺乳類細胞に同定されたマイクロRNAを形質導入して過剰発現させることで，細胞の機能アッセイを行いTRIM32も共発現させることで，その機能の変化を細胞増殖実験、腫瘍増殖実験、シスプラチンに対するアポトーシス実験にておこなった。
また、臨床標本（新鮮凍結標本およびホルマリン固定標本）を用いて，同定されたマイクロRNAとそのターゲットタンパク質，およびTRIM32の発現を解析し，癌の進行度，予後など比較検討した結果、TRIM32に特異的に結合するマイクロRNAとしてmiR-134を同定した。その後、ルシフェラーゼアッセイによりmiR-134の活性化を調べたかが、活性化は確認できなかった。その後、細胞株を変更して同じく実験を行ったが同様の結果であった。また、TRIM32を過剰発現させた細胞株、またはノックダウンさせた細胞株でもmiR-134の活性化、発現量の変化は確認できなかった。
当該研究は最終年度であるが、引き続きルシフェラーゼアッセイに用いるプラスミドのデザインの再検討をおこない、細胞株を変更して、TRIM32に特異的に結合するマイクロRNAを新たに同定し、同定されたマイクロRNAの活性化の確認とターゲットタンパク質の発現解析をおこなう予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
24年度が最終年度であるため、記入しない。
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