2010 Fiscal Year Annual Research Report
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22792026
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| Research Institution | Matsumoto Dental University |
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Principal Investigator |
堂東 亮輔 松本歯科大学, 大学院・歯学独立研究科, 非常勤講師 (40329470)
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| Keywords | 薬剤耐性機構 / 薬剤排泄機構 / ABCtransporter |
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| Research Abstract |
ヒト耳下腺由来培養細胞(HSY),ヒト顎下腺由来培養細胞(HSG)におけるMDR1,MRP1およびGSTsの発現を検討.抗癌剤未処理と処理細胞の蛋白とmRNAを抽出,ABC transporterであるMDR1,MRP1-7の発現についてReal time PCR, Western blot法で検討,さらにMRPはグルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST)と結合した複合体を細胞外に排泄することから,GSTのサブクラスの発現を検討した.抗癌剤はビンクリスチン,ドセタキセル,タキソール,ドキソルビシン,5-FUを使用.ビンクリスチンを反復処理すると口腔扁平上皮癌に比べ唾液腺癌の培養細胞においてMDR1,MRP1,GST-piが強く誘導された.唾液腺癌培養細胞ではドセタキセル、ドキソルビシン処理によってMRPとGST-piの発現が誘導された.薬剤処理によるトランスポーターの発現が薬剤耐性に関与していることをベラパミル,BSO,クルクミンなどのトランスポーター阻害剤を用いて検討.ビンクリスチンを3クール処理したHSY細胞と未処理のHSY細胞を使用する.MDR1の機能抑制として,ベラパミルやジクマロールを培養上清中に添加して機能を抑制,薬剤に対する感受性の変化はMTT法による50%殖抑制濃度(IC50)で評価.MRP1はグルタチオン抱合物質やグルクロン酸抱合体を基質として認識することから,その抱合体形成を触媒するGSTの発現を阻害.GST阻害剤のPC803,クルクミンを培養上清中に添加してグルタチオン解毒抱合を抑制し,薬剤感受性をIC50で評価.グルタチオン合成酵素阻害剤のBSOを培養液に添加してグルタチオン(GSH)を枯渇させMRPにはGSHが必要か検討した.ビンクリスチン耐性唾液線癌培養細胞をGST阻害剤で処理したところIC50が低値を示し耐性克服がみられた.
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