加齢黄斑変性関連遺伝子ARMS2の機能および疾患発症機序の解明

2011 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 22890007
• Research Institution: Hokkaido University
• Principal Investigator: 神田 敦宏 北海道大学, 大学院・医学研究科, 特任助教 (80342707)
• Keywords: 加齢黄斑変性 / LOC387715 / ARMS2

Research Abstract

加齢黄斑変性(Age-related Macular Degeneration, AMD)の発症と深く関与することが報告されているが、その詳細な役割が明らかにされていないARMS2(Age-Related Maculopathy Susceptibility 2)タンパク質の機能、およびAMDの発症メカニズム解明を行った。(1)ARMS2遺伝子はヒトを含む霊長類のみに存在し、その他の生物には存在しないことから、霊長類特有の細胞性質・機能にARMS2は関与していると推測される。そこでARMS2遺伝子をノックダウンしたヒト培養細胞を樹立し、細胞機能の変化を観察する。ARMS2遺伝子に対して8種類のshRNAをデザインし、発現ベクターにクローニングした。まず、これらコンストラクトとタグを付加したARMS2遺伝子をヒト培養細胞にco-transfectionを行い、過剰発現の系でノックダウン効率をウエスタンブロッティング法で確認したところ、8種類のうち2つで有意なタンパク発現の減少が確認された。現在、このコンストラクトを培養細胞に遺伝導入し、薬剤によるスクリーニングにより、安定発現細胞株の樹立を行っている。(2)ARMS2を特異的に認識する抗体作製やGSTプルダウンアッセイなどを行うため、全長ARMS2タンパク質の大量発現を大腸菌にて試みた。しかし、ARMS2タンパク質は多くのレアコドンを含んでいるため、通常の方法にて発現を行うと多くの断片タンパク質の発現が認められた。そこで、それらレアコドンの置換を行うことで、全長ARMS2タンパク質を効率よく発現させることに成功した。今後、この精製タンパク質と分子生物学的手法を用いて機能解析を行う。

Research Products

• [Journal Article] Replication of a microsatellite genome-wide association study of Behcet's disease in a Korean population (2012)
  • Author(s): Horie Y, Meguro A, Kitaichi N, Lee EB, Kanda A, Noda K, Song YW, Park KS, Namba K, Ota M, Inoko H, Mizuki N, Ishida S, Ohno S
  • Journal Title: Rheumatology Volume: (印刷中)
  • DOI: doi:10.1093/rheumatology/ker444
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] ALPHAB-CRYSTALLIN EXPRESSION IN EPIRETINAL MEMBRANE OF HUMAN PROLIFERATIVE DIABETIC RETINOPATHY (2012)
  • Author(s): Dong Z, Kase S, Ando R, Fukuhara J, Saito W, Kanda A, Murata M, Noda K, Ishida S
  • Journal Title: Retina Volume: (印刷中)
  • DOI: DOI:10.1097/IAE.0b013e318233ab9c
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Immunolocalization of Vascular Adhesion Protein-1 in Human Conjunctival Tumors (2012)
  • Author(s): Fukuhara J, Kase S, Noda K, Murata M, Noda M, Ando R, Dong Z, Kanda A, Ishida S
  • Journal Title: Ophthalmic Res Volume: 48 Pages: 33-37
  • DOI: DOI:10.1159/000335983
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Evidence of association of APOE with age-related macular degeneration-a pooled analysis of 15 studies (2011)
  • Author(s): McKay GJ, Patterson CC, Chakravarthy U, Dasari S, Klaver CC, Vingerling JR, Ho L, de Jong PT, Fletcher AE, Young IS, Seland JH, Rahu M, Soubrane G, Tomazzoli L, Topouzis F, Vioque J, Hingorani AD, Sofat R, Dean M, Sawitzke J, Seddon JM, Peter I, Webster AR, Moore AT, Yates JR, Cipriani V, Fritsche LG, Weber BH, Keilhauer CN, Lotery AJ, Ennis S, Klein ML, Francis PJ, Stambolian D, Orlin A, Gorin MB, Weeks DE, Kuo CL, Swaroop A, Othman M, Kanda A, Chen W, Abecasis GR, Wright AF, Hayward C, Baird PN, Guymer RH, Attia J, Thakkinstian A & Silvestri G
  • Journal Title: Hum Mutat Volume: 32 Pages: 1407-1416
  • DOI: doi:10.1002/humu.21577
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Tissue factor expression in human pterygium (2011)
  • Author(s): Ando R, Kase S, Ohashi T, Dong Z, Fukuhara J, Kanda A, Murata M, Noda K, Kitaichi N, Ishida S
  • Journal Title: Mol Vis Volume: 17 Pages: 63-69
  • DOI: PMID:21245964,<http://www.molvis.org/molvis/v17/a9>
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Complement factor d in age-related macular degeneration (2011)
  • Author(s): Santon C, Yates J, Den HA, Seddon J, Swaroop A, Stambolian D, Fauser, S, Hoyng, C, Kanda A, Branham K, Othman M, Chen W, Kortvely E, Chalmers K, Hayward C, Moore A, Dhillon B, Ueffing M, Wright A
  • Journal Title: Invest Ophthalmol Vis Sci Volume: 52 Pages: 8828-8834
  • DOI: doi:10.1167/iovs.11-7933
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Variations in apolipoprotein E frequency with age in a pooled analysis of a large group of older people (2011)
  • Author(s): McKay GJ, Silvestri G, Chakravarthy U, Dasari S, Fritsche LG, Weber BH, Keilhauer CN, Klein ML, Francis PJ, Klaver CC, Vingerling JR, Ho L, De Jong PT, Dean M, Sawitzke J, Baird PN, Guymer RH, Stambolian D, Orlin A, Seddon JM, Peter I, Wright AF, Hayward C, Lotery AT, Ennis S, Gorin MB, Weeks DE, Kuo CL, Hingorani AD, Sofat R, Cipriani V, Swaroop A, Othman M, Kanda A, Chen W, Abecasis GR, Yates JR, Webster AR, Moore AT, Seland JH, Rahu M, Soubrane G, Tomazzoli L, Topouzis F, Vioque J, Young IS, Fletcher AE, Patterson CC
  • Journal Title: Am J Epidemiol Volume: 173 Pages: 1357-1364
  • DOI: doi:10.1093/aje/kwr015
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Combined genotyping and genome-wide expression analysis of peripheral blood to identify biomarkers for age-related macular degeneration (2011)
  • Author(s): Kanda A, Chen W, Ruzycki P, Brooks M, Chew EY, Abecasis GR, Stambolian D, Swaroop A
  • Organizer: ARVO (Association for Research in Vision and Ophthalmology) Annual Meeting
  • Place of Presentation: Broward County Convention Center (USA)
  • Year and Date: 20110501-20110505
• [Presentation] 網膜疾患における(プロ)レニン受容体および関連分子の発現解析 (2011)
  • Author(s): 神田敦宏、野田航介、斎藤航、Anand Swaroop、石田晋
  • Organizer: 第34回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜(神奈川)
  • Year and Date: 2011-12-14
• [Presentation] 糖尿病網膜症における(プロ)レニン受容体の血管新生活動性への関与 (2011)
  • Author(s): 神田敦宏
  • Organizer: 第4回Retina research meeting
  • Place of Presentation: 東京大学(東京)
  • Year and Date: 2011-11-12