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2023 Fiscal Year Annual Research Report

Development of a novel light-triggered genome editing system for the treatment of retroviral infections

Research Project

Project/Area Number 22H00593
Research InstitutionNagasaki University

Principal Investigator

山吉 麻子  長崎大学, 医歯薬学総合研究科(薬学系), 教授 (70380532)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 徳田 崇  東京工業大学, 科学技術創成研究院, 教授 (50314539)
駒野 淳  大阪医科薬科大学, 薬学部, 教授 (60356251)
Project Period (FY) 2022-04-01 – 2026-03-31
Keywordsゲノム編集 / 核酸医薬 / 光操作 / 光架橋性核酸 / ウイルス感染症
Outline of Annual Research Achievements

1. Light-Scissorsの分子構造の最適化(山吉)
2022年度、我々の研究グループでは、人工核酸に光架橋性を付与できる化合物の開発に成功した。今年度(2023年度)はこの化合物を用い、次世代ゲノム編集ツールとして期待されているペプチド核酸に光架橋性を付与し、標的遺伝子との結合親和性や光架橋能を評価した。その結果、tail-clamp型PNA にソラレンを導入した核酸でのみ、中性条件下での標的遺伝子との結合と架橋が認められた。このため、ソラレン導入tail-clamp型PNA (Ps-tc-PNA)を細胞系等の実験に用いることとした。
2. Light-Scissors のゲノム編集効率の評価(モデル細胞系)(駒野、山吉)
ゲノム編集効率を迅速評価するためのルシフェラーゼ発現プラスミドを構築した。このプラスミドは、通常時は Firefly Luciferase(FF Luc)活性のみ観察されるが、Ps-tc-PNAによるゲノム編集が起こると、FF Luc活性が減少し、 Renilla Luciferase(R Luc)活性が回復する。この評価系を用い、モデル配列を標的としたPs-tc-PNAによるゲノム編集効率を評価した結果、UV照射時のみ、FF Luc活性が減少し、R Luc活性が回復した。これらのデータより、Ps-tc-PNAを用いて生細胞中でのゲノム編集が達成されたことが示された。また、Ps-tc-PNA の配列の向きによって、誘起されるゲノム編集が異なることも示された。
3. in vivo展開を可能とする光照射装置の開発(徳田、山吉)
主要なリンパ系組織に照射可能なLED形状のUV光照射装置を開発し、体内埋入実験を行った。柔軟な平面型光刺激デバイスを組み合わせ、新しい体内埋入型光照射装置を開発した。現在、in vivo での埋入実験、照度の検証を行っているところである。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

今年度、生細胞中でのゲノム編集を実現する新たな Light-Scissors を開発することに成功した。さらに、PNAの配列の方向性により、ゲノム編集効率を操作できる可能性も示された。今後、DNA修復機構と照らし合わせて考察することで、新たな遺伝子制御ツールの開発も見込まれる。
さらに、ゲノム編集の迅速評価系を用い、プロウイルス遺伝子を標的とした Light-Scissors の開発にも着手している。in vivo光照射デバイスも完成したことから、当初の計画以上に進展していると言うことができる。

Strategy for Future Research Activity

1. Light-Scissorsの分子構造の最適化(山吉)
既に様々な化学構造を持つLight-Scissorsの開発に成功しており、あらゆる人工核酸に光架橋性を付与することを可能とする化合物の開発にも成功した(2023年 PCT出願済)。この化合物を用い、次世代ゲノム編集ツールとして期待されているペプチド核酸に光架橋性を付与し、標的遺伝子との結合親和性や光架橋能を網羅的に評価する。2023年度までの検討により、細胞内で光ゲノム編集を実現する人工核酸の開発にも成功しているため、分子設計のさらなる最適化をはかる。
2. Light-Scissors のゲノム編集効率の評価(モデル細胞系)(駒野、山吉)
2023年度までに、Light-Scissors を用いたゲノム編集効率を評価する実験系として、宿主細胞からのプロウィルスゲノムの除去効率を迅速評価できるルシフェラーゼレポータアッセイを構築することに成功し、前項目(1)で合成したLight-Scissorsのゲノム編集効率を評価してきた。昨年度まではモデル配列を用いた検討に注力してきたが、2024年度はHTLV-1プロウイルス遺伝子に対して結合する三重鎖形成核酸を新たに設計し、これにソラレンを導入したLight-Scissors を合成し、プロウイルスゲノム除去効率の評価、光照射によるその時空間的制御について検討する。
3. in vivo展開を可能とする光照射装置の開発(徳田、山吉)
2023年度までに、柔軟な平面型光刺激デバイスをのプロトタイプとして、ポリイミドフレキシブル基板およびLEDチップを組み合わせ、新しい体内埋入型光照射装置を開発してきた。その結果、より柔軟性を持たせたデバイスが in vivo埋入に良好であることが判明したため、基盤の在室や形状についてさらなる改良をはかる。

Remarks

2024年5月1日付で東京工業大学へ異動いたしました。

  • Research Products

    (42 results)

All 2023 Other

All Journal Article (8 results) (of which Peer Reviewed: 8 results) Presentation (31 results) (of which Int'l Joint Research: 10 results,  Invited: 12 results) Remarks (2 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results) (of which Overseas: 1 results)

  • [Journal Article] Modular Synthesis of Methyl-Substituted Novel Psoralen N-Hydroxysuccinimide Esters and Evaluation of DNA Photocrosslinking Properties of the Corresponding Triplex-Forming Oligonucleotide Conjugates2023

    • Author(s)
      Mikame Yu、Maekawa Nagisa、Kimura Soichiro、Yamayoshi Asako、Nakao Juki
    • Journal Title

      Synlett

      Volume: - Pages: -

    • DOI

      10.1055/a-2229-7441

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Dynamic and static control of the off-target interactions of antisense oligonucleotides using toehold chemistry2023

    • Author(s)
      Terada Chisato、Oh Kaho、Tsubaki Ryutaro、Chan Bun、Aibara Nozomi、Ohyama Kaname、Shibata Masa-Aki、Wada Takehiko、Harada-Shiba Mariko、Yamayoshi Asako、Yamamoto Tsuyoshi
    • Journal Title

      Nature Communications

      Volume: 14 Pages: 7972

    • DOI

      10.1038/s41467-023-43714-0

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Recent Advancements in Development and Therapeutic Applications of Genome-Targeting Triplex-Forming Oligonucleotides and Peptide Nucleic Acids2023

    • Author(s)
      Mikame Yu、Yamayoshi Asako
    • Journal Title

      Pharmaceutics

      Volume: 15 Pages: 2515-2515

    • DOI

      10.3390/pharmaceutics15102515

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Development and Crosslinking Properties of Psoralen‐Conjugated Triplex‐Forming Oligonucleotides as Antigene Tools Targeting Genome DNA2023

    • Author(s)
      Mikame Yu、Eshima Honoka、Toyama Haruki、Nakao Juki、Matsuo Misaki、Yamamoto Tsuyoshi、Hari Yoshiyuki、Komano Jun A.、Yamayoshi Asako
    • Journal Title

      ChemMedChem

      Volume: 18 Pages: e202300348

    • DOI

      10.1002/cmdc.202300348

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Exosome-Hijacking Drug Delivery System with Branched Arginine Linker Effectively Deliver Antisense Oligonucleotides into Lung Adenocarcinoma Cells2023

    • Author(s)
      Oyama Shota、Tomita Mao、Hata Moeka、Mikame Yu、Yamamoto Tsuyoshi、Ashihara Eishi、Yamayoshi Asako
    • Journal Title

      Chemical and Pharmaceutical Bulletin

      Volume: 71 Pages: 819-823

    • DOI

      10.1248/cpb.c23-00430

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Unique Crosslinking Properties of Psoralen‐Conjugated Oligonucleotides Developed by Novel Psoralen N‐Hydroxysuccinimide Esters2023

    • Author(s)
      Nakao Juki、Mikame Yu、Eshima Honoka、Yamamoto Tsuyoshi、Dohno Chikara、Wada Takehiko、Yamayoshi Asako
    • Journal Title

      ChemBioChem

      Volume: 24 Pages: e202200789

    • DOI

      10.1002/cbic.202200789

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] ゲノムDNAを標的とした光駆動核酸の開発2023

    • Author(s)
      中尾樹希、三瓶悠、山吉麻子
    • Journal Title

      光アライアンス

      Volume: 10 Pages: 30-34

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 核酸医薬とゲノム編集技術2023

    • Author(s)
      三瓶悠、山本剛史、山吉麻子
    • Journal Title

      CLINICAL NEUROSCIENCE

      Volume: 41 Pages: -

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] 光で駆動する人工核酸の中分子医薬としての可能性とは?2023

    • Author(s)
      山吉麻子
    • Organizer
      日本薬学会第144年会
    • Invited
  • [Presentation] エクソソームをハイジャックする新しい核酸医薬の創製と物質共生2023

    • Author(s)
      山吉麻子
    • Organizer
      第17回中分子創薬に関わる次世代産業研究会
    • Invited
  • [Presentation] プロウイルス遺伝子の不活性化を目指した新規光駆動型核酸医薬2023

    • Author(s)
      山吉麻子
    • Organizer
      第46回日本分子生物学会
    • Invited
  • [Presentation] 遺伝子のエピジェネティック修飾を標的とした光駆動型核酸の開発2023

    • Author(s)
      山吉麻子
    • Organizer
      第46回日本分子生物学会
    • Invited
  • [Presentation] エクソソーム随伴型のDDSを可能にするExomiR-Tracker技術の目指す将来像2023

    • Author(s)
      山吉麻子
    • Organizer
      JBA創薬モダリティ基盤研究会
    • Invited
  • [Presentation] 人工核酸の物質共生を可能とする細胞内送達技術2023

    • Author(s)
      山吉麻子
    • Organizer
      第13回CSJ化学フェスタ
    • Invited
  • [Presentation] 遺伝子の非コード領域を狙い撃つ核酸医薬の創製と物質共生2023

    • Author(s)
      山吉麻子
    • Organizer
      「細胞を創る」研究会 16.0
    • Invited
  • [Presentation] Development of Novel Nucleic Acid Drugs targeting non-coding Genes and Material Symbiosis2023

    • Author(s)
      Asako Yamayoshi
    • Organizer
      International Symposium for the 80th Anniversary of the Tohoku Branch of the Chemical Society of Japan
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Exosome-hijacking drug delivery system targeting circulating microRNAs2023

    • Author(s)
      Asako Yamayoshi
    • Organizer
      The 8th NatsJ
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Symbiotic exosome-hijacking drug delivery system targeting circulating microRNAs2023

    • Author(s)
      Asako Yamayoshi
    • Organizer
      Transformative Research Area (B) “SPEED” Symposium -a Bridge between Chemistry and Biotechnology-,
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Development of Novel Exosome-Hijacking Drug Delivery System for Targeting Exosomal-microRNAs2023

    • Author(s)
      Asako Yamayoshi
    • Organizer
      Gordon Research Conference Nucleosides, Nucleotides and Oligonucleotides
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] Novel symbiotic exosome-hijacking drug delivery system targeting exosomal-microRNAs2023

    • Author(s)
      Asako Yamayoshi
    • Organizer
      The 7th Gratama Workshop
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] ゲノム編集を可能とする新規光架橋性人工核酸の開発2023

    • Author(s)
      中尾樹希、三瓶悠、江島穂乃香、山本剛史、堂野主税、和田健彦、山吉麻子
    • Organizer
      日本薬学会第144年会
  • [Presentation] 光架橋性基として有する新規Psoralen導入型三重鎖形成核酸のDNAへの架橋特性評価2023

    • Author(s)
      木村聡一郎、前川なぎさ、中尾樹希、山吉麻子、三瓶悠
    • Organizer
      日本薬学会第144年会
  • [Presentation] 非天然型核酸が誘導する免疫惹起機構の解明2023

    • Author(s)
      秦萌花、岡本大輝、大山将大、三瓶悠、竹内理、植畑拓也、山吉麻子
    • Organizer
      日本薬学会第144年会
  • [Presentation] 新規ソラレン導入三重鎖形成核酸によるヒト乳がん細胞への選択的な細胞死誘導効果2023

    • Author(s)
      外山 春樹、中尾 樹希、堂野 主税、和田 健彦、山吉 麻子、三瓶 悠
    • Organizer
      日本化学会第104春期年会
  • [Presentation] Development of Novel Psoralen-conjugated Triplex-Forming Oligonucleotides for the Selective Death of Human Breast Cancer Cells2023

    • Author(s)
      外山 春樹、中尾 樹希、堂野 主税、和田 健彦、三瓶 悠、山吉 麻子
    • Organizer
      SUPRA FIBER INTERNATIONAL SUMMIT NUCLEIC ACIDS
  • [Presentation] ゲノム編集を可能とする新規光架橋性オリゴヌクレオチドの開発2023

    • Author(s)
      中尾樹希、江島穂乃香、三瓶悠、山本剛史、堂野主税、和田健彦、山吉麻子
    • Organizer
      第46回日本分子生物学会年会
  • [Presentation] プロタミン導入型抗体の作製とエクソソーム随伴導入薬物システムへの応用2023

    • Author(s)
      梶谷美佳、大山将大、喜多遥斗、三瓶悠、山本剛、山吉麻子
    • Organizer
      第40回日本薬学会九州山口支部大会
  • [Presentation] Stabilization of DNA Triplex using Novel Psoralen-Introduced Triplex-Forming Oligonucleotides Enable the Induction of Stronger Cell Death of Human Breast Cancer Cells.2023

    • Author(s)
      Haruki Toyama, Honoka Eshima, Juki Nakao, Yu Mikame、Asako Yamayoshi
    • Organizer
      ISNAC 2023
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 肺がん細胞の標的化を可能とするエクソソーム随伴型核酸医薬送達システムの開発2023

    • Author(s)
      大山将大、楠本将)、三瓶悠、山本剛、山吉麻子
    • Organizer
      第10回細胞外小胞学会学術集会
  • [Presentation] ゲノム編集を可能とする新規光駆動型オリゴヌクレオチドの開発2023

    • Author(s)
      中尾樹希、江島穂乃香、三瓶悠、山本剛史、堂野主税、和田健彦、山吉麻子
    • Organizer
      第13回CSJ化学フェスタ
  • [Presentation] 新規ソラレン導入型三重鎖形成核酸による三重鎖安定化技術の開発と活性評価2023

    • Author(s)
      外山春樹、江島穂乃香、中尾樹希、三瓶悠、山吉麻子
    • Organizer
      第13回CSJ化学フェスタ
  • [Presentation] 新規Psoralen-NHSの開発と光架橋性オリゴヌクレオチドへの展開2023

    • Author(s)
      Juki Nakao, Yu Mikame, Honoka Eshima, Tsuyoshi Yamamoto, Chikara Dohno, Takehiko Wada, Asako Yamayoshi
    • Organizer
      日本核酸医薬学会 第8回年会
  • [Presentation] 糖部架橋型核酸を基盤とした新規ソラレン導入型三重鎖形成核酸の開発2023

    • Author(s)
      三瓶悠、外山春樹、江島穂乃香、中尾樹希、山本剛史、張功幸、堂野主税、和田健彦、山吉麻子
    • Organizer
      日本核酸医薬学会 第8回年会
  • [Presentation] 新規アルギニン化抗体の作製とエクソソーム随伴導入システムへの応用2023

    • Author(s)
      楠本将史、大山将大、三瓶悠、山本剛史、山吉麻子
    • Organizer
      日本核酸医薬学会 第8回年会
  • [Presentation] ラクトース修飾デンドリマーβ シクロデキストリン結合体 による mRNA 細胞内送達能の検証2023

    • Author(s)
      秦萌花、大山将大、山本剛史、北岸宏亮、川上茂、有馬英俊、山吉麻子
    • Organizer
      日本核酸医薬学会 第8回年会
  • [Presentation] Development of Chemically Modified Dendrimers for mRNA Delivery2023

    • Author(s)
      Moeka Hata, Shota Oyama, Tsuyoshi Yamamoto, Hiroaki Kitagawa, Shigeru Kawakami, Hidetoshi Arima, Asako Yamayoshi
    • Organizer
      7th Gratama workshop
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Novel psoralen NHS Esters as Versatile Tools in the Development of Photo reactive Oligonecleotides2023

    • Author(s)
      Juki Nakao, Yu Mikame, Honoka Eshima, Tsuyoshi Yamamoto, Chikara Dohno, Takehiko Wada, Asako Yamayoshi
    • Organizer
      7th Gratama workshop
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Development of a highly functionalized exosome-hijacking DDS using an avidin-biotin system2023

    • Author(s)
      Shota Oyama, Masahumi Kusumoto, Moeka Hata, Yu Mikame, Tsuyoshi Yamamoto, Asako Yamayoshi
    • Organizer
      7th Gratama workshop
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Triplex stabilizing effect and photo-crosslinking ability of a novel psoralen-conjugated triplex-forming oligonucleotide2023

    • Author(s)
      Yu Mikame, Honoka Eshima, Juki Nakao, Tsuyoshi Yamamoto, Yoshiyuki Hari, Dohno Chikara, Wada Takehiko, Asako Yamayoshi
    • Organizer
      7th Gratama workshop
    • Int'l Joint Research
  • [Remarks] 長崎大学 薬学部 機能性分子化学研究室

    • URL

      https://www.ph.nagasaki-u.ac.jp/lab/function/index-j.html

  • [Remarks] Researchmap(山吉麻子)

    • URL

      https://researchmap.jp/7000011330

  • [Patent(Industrial Property Rights)] 新規ソラレン類化合物2023

    • Inventor(s)
      山吉麻子、三瓶悠、中尾樹希
    • Industrial Property Rights Holder
      山吉麻子、三瓶悠、中尾樹希
    • Industrial Property Rights Type
      特許
    • Industrial Property Number
      PCT/JP2023/46152
    • Overseas

URL: 

Published: 2024-12-25  

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