2023 Fiscal Year Research-status Report
| Project/Area Number |
22K05840
|
|---|
| Research Institution | Fisheries Research and Education Agency |
|---|
Principal Investigator |
湯浅 光貴 国立研究開発法人水産研究・教育機構, 水産技術研究所(廿日市), 任期付研究員 (00898984)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
紫加田 知幸 国立研究開発法人水産研究・教育機構, 水産技術研究所(長崎), 主任研究員 (40603048)
内田 肇 国立研究開発法人水産研究・教育機構, 水産技術研究所(長崎), 研究員 (50805132)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
|
| Keywords | 有害赤潮 / 魚毒性 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
令和5年度は、有害赤潮原因プランクトンAlexandrium leeiの魚毒成分を分画精製するために、A. leei培養株の大量培養系を構築した。A. leei培養液10 Lを通気した状態で培養した結果、安定的に増殖することがわかり、非通気静置培養よりも毒性が高くなることが明らかとなった。大量培養後、凍結融解したA. leei培養液を用いて、令和4年度に確立した方法で分画精製を行った。試料を疎水性物質を吸着する合成吸着樹脂に通して含水メタノールで分画して乾固した後、蒸留水に溶解した。次にジエチルエーテルと水で液液分配して毒性を有する水層を得た。有毒画分をオクタデシルシリル化（ODS）シリカゲル担体に通して含水メタノールで分画し乾固した後、滅菌海水へ希釈した試料をヒメダカおよびブリ稚魚へ暴露した。その結果、一部の分画液でヒメダカおよびブリ稚魚への強い毒性を確認した。さらに精製を進めるため、分画精製した有毒画分をメタクリレート系ゲル濾過担体に通して100%メタノールで分画した。その結果、更なる分画に成功し、一部の画分でヒメダカやＲＤ（ヒト横紋筋肉種）培養細胞、シオミズツボワムシに対する強い毒性を確認した。
以上により、A. leeiの有する魚毒成分を液液分配や固相抽出、ゲル濾過クロマトグラフィーで分画精製できることを確認し、適切な担体を選定することができた。また、ヒメダカだけでなくブリでも同様の分画液でへい死が確認されたことから、養殖対象魚に対する魚毒成分を精製できていると考えられる。また、分画精製した有毒画分は魚類だけでなく、ＲＤ細胞やシオミズツボワムシに対しても毒性を示すことが明らかとなった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の予定通り、対象プランクトンの大量培養系を確立し、複数の精製段階を経ることができている。また、毒性評価をヒメダカだけでなく、養殖対象魚のブリでも実施しており、両魚種で同様の結果を得ることができている。以上の根拠から概ね順調に進展していると考えられる。
|
| Strategy for Future Research Activity |
令和6年度は令和5年度までに確立した分画手法によってA. leeiの魚毒含有画分を大量に蓄積し、高速液体クロマトグラフィー等に供して最終精製を行う。最終精製品の魚毒性をヒメダカ等へ暴露して評価する。また、A. leeiの魚毒化合物の最終精製品を、LC/MS/MS等の機器分析に供して魚毒化合物の解析を試みる。
|
