2023 Fiscal Year Research-status Report
微小管ダイナミクスを制御する新規微小管付随タンパク質の機能解析
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22K06271
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| Research Institution | Okayama University of Science |
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Principal Investigator |
濱田 隆宏 岡山理科大学, 生命科学部, 准教授 (20452534)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | 微小管 / 植物 / 微小管付随タンパク質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、微小管付随タンパク質群プロテオーム解析により発見された新規微小管付随タンパク質群（MAPs）であるCCMA familyの機能解析を行なっている。今年度はこれまでに明確ではなかった分裂期の微小管構造物におけるCCMAの局在解析を行った。CCMA4-GFPとpUBQ10-mCherry-tub6でラベルした微小管との同時観察により、CCMA4は表層微小管以外にも、PPB (preprophase band)、紡錘体、フラグモプラストなどに局在することが明らかとなった。
また昨年度にCCMAの四重変異体において行われた微小管ダイナミクス解析では「野生型よりも微小管の重合速度が上昇する」という結果が得られていた。今年度の更なる解析により、CCMAの四重変異体では「野生型よりも微小管の重合から脱重合に切り替わるタイミング」であるカタストロフの頻度が上昇するという結果が得られた。このことはCCMAは微小管プラス端でカタストロフを抑制している可能性を示唆している。
CCMA1とCCMA4の更なる機能解析のために、近位依存性ビオチン標識法により、CCMA1やCCMA4と相互作用するタンパク質をビオチン標識し、精製したタンパク質を質量分析計により同定した。CCMA１の相互作用タンパク質としてCCMA1からCCMA4の全てCCAM familyが同定されたのに対し、CCMA4の相互作用タンパク質としてはCCMA３のみが同定され、CCMA1やCCMA2は同定されなかった。また、これら以外にも、CCMA1やCCMA4と特異的に相互作用すると思われるタンパク質候補も同定できた。その一方、相互作用が期待されていたtubulinや既知の微小管プラス端タンパク質は検出されなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
変異体における微小管ダイナミクスの追加解析などを行ったために研究成果の取りまとめが遅れている。また今年度に行う予定であったCCMAのin vitroにおける解析ができていない。そのためやや遅れているとした。
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| Strategy for Future Research Activity |
CCMAの局在解析と変異体の解析は終了しており、論文として成果発表を行う。また相互作用タンパク質の同定に関しては、検出条件を検討し、再解析を行う。またCCMAのin vitroにおける解析も行う。
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| Causes of Carryover |
変異体における微小管ダイナミクスの追加解析に時間を要し、今年度に行う予定であったCCMAのin vitroにおける解析に至らなかったのが原因である。そのためin vitro解析は次年度に行うことにした。
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