2022 Fiscal Year Research-status Report
AAVベクターの静脈投与のみでコンディショナルノックアウトを行う手法の開発
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22K06454
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
今野 歩 群馬大学, 大学院医学系研究科, 講師 (40509048)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | AAVベクター / Cre-loxP / コンディショナルノックアウト |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年、ベクター改変技術の進歩により、血液脳関門透過型AAVベクター(PHP.B)をはじめとした革新的な遺伝子送達ツールが開発され、脳神経科学の研究領域に変革をもたらしている。申請者はこれまで細胞種特異的なプロモーターを用いて、PHP.Bの単回静脈投与で脳全域において細胞種特異的な遺伝子導入やノックダウンを起こす手法を開発してきた。本研究では、この技術をさらに発展させるため、AAVの静脈投与のみで任意の週齢のfloxマウスにおいて細胞種特異的ノックアウト(conditional knockout; cKO)を起こす手法の確立を目指し研究を実施した。
細胞種特異的プロモーターでCreを発現するPHP.Bの静注では、目的外での細胞でもわずかに発現したCreにより、KOが生じてしまうことが経験的に分かっていた。しかしながら、申請者はこの現象を回避する「FlpO-dCreシステム」を考案し、研究を実施した。その結果、AAVベクターの静脈投与のみで、ニューロンまたはアストロサイトに関して、高い特異性（おおよそ90％程度）を維持したまま、cKOが行える手法の開発に成功した。現在、現在論文投稿の最終段階まで準備ができており、まもなく投稿予定である。
また、関連する研究として、AAV血清型2（AAV2）を元にした血液脳関門透過型AAVベクター AAV-BR1Nに関する論文を発表した（Molecular Therapy - Methods & Clinical Development誌に、2023年3月オンライン掲載）。
その他、7報の論文を2022年度中に報告している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
1: Research has progressed more than it was originally planned.
Reason
研究計画の1年目で既に論文投稿間近なところまで研究が進んでいるため。
当初予定していた残りのターゲット細胞に関しても、プラスミドのDNAの作製はほとんど完了しており、当初の計画は早期に達成される見込である。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初ターゲットとしていた残りの細胞種である興奮性ニューロン、抑制性ニューロン、脳血管内皮に関しても同様の手法が適応可能かどうか検討する。
さらに現在新規に、オリゴデンドロサイトに対するプロモーターに関しても特異性を検討中である。このため、当初の研究予定には入っていなかったが、十分な特異性が見込まれる場合は、オリゴデンドロサイトに関してもFlpO-dCreの手法を適応し、cKOを検討する。
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| Causes of Carryover |
研究計画が予想以上に順調に進展し、効率的に研究が進んだため、残額が生じた。残額は、2022年度末に故障したPCR機器の代替品を新規購入費用に充てる予定である。
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