2022 Fiscal Year Research-status Report
Screening of SARS-CoV-2 protease inhibitors using FlipGFP reporter system
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22K06625
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| Research Institution | National Institute of Infectious Diseases |
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Principal Investigator |
染谷 雄一 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 室長 (50283809)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
平野 順紀 大阪大学, 微生物病研究所, 特任助教(常勤) (50899101)
林 豪士 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (80824648)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | SARS-CoV-2 / プロテアーゼ / 阻害剤 / FlipGFP |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究課題はSARS-CoV-2のプロテアーゼをターゲットとしたFlipGFPレポーターシステムを利用して、様々な西洋薬や生薬から効果的にSARS-CoV-2プロテアーゼを阻害する候補化合物（物質）を同定することを目的としている。初年度はまず当該システムを駆使してSARS-CoV-2 3CLプロテアーゼ(pro)を阻害する生薬エキスを探索した。当該系は293T細胞にSARS-CoV-2 3CLproの切断配列を有するFlipGFP発現プラスミドおよびSARS-CoV-2 3CLpro発現プラスミドをトランスフェクションし、ハイコンテントイメージングシステム（Operetta CLS）によりGFP蛍光を呈する細胞をカウントすることで3CLpro活性を評価する。まず20種の生薬エキスについてスクリーニングを実施したところ、未処理群と比較して、4種の生薬エキス存在下でGFP陽性細胞数が80%以上低下した。次に、これら生薬の3CLpro阻害効果を市販のin vitro SARS-CoV-2 3CL Protease Activity Assay Kitを用いて再度検証したところ、２種の生薬で85%程度、２種の生薬で40%程度の活性阻害効果が認められた。さらに、現在FDA承認薬ライブラリー（1200種）を用いたスクリーニングを実施中であり、薬剤未処理群と比較して、GFP陽性細胞数を減少させる化合物を幾つか見出している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度に行ったスクリーニングにより、SARS-CoV-2 3CLproを阻害する生薬を幾つか見出すことに成功したため、「おおむね順調に進展している」とした。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在実施中のFlipGFPシステムを用いたスクリーニングを次年度も続けると共に、ヒットした化合物・生薬についてin vitro SARS-CoV-2 3CL Protease Assay Kitを用いた阻害効果、および、SARS-CoV-2を用いた感染阻害効果の検証を行う。また、FlipGFPを用いたプロテアーゼ活性評価系の汎用性・発展性を検討するため、コロナウイルス以外の複数のRNAウイルスにおいて類似系の樹立を試みる予定である。
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| Causes of Carryover |
ハイコンテントイメージングシステム（Operetta CLS）付属機器の不調によりスクリーニングを中断した期間があったため、次年度使用額が生じた。次年度使用額は当該実験に必要な消耗品の購入に充てる。
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