2023 Fiscal Year Research-status Report
細胞膜リン脂質リモデリングを標的とした新規抗がん剤の創出
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22K06675
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| Research Institution | Microbial Chemistry Research Foundation |
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Principal Investigator |
山崎 洋子 公益財団法人微生物化学研究会, 微生物化学研究所 沼津支所, 主任研究員 (80342690)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
百瀬 功 公益財団法人微生物化学研究会, 微生物化学研究所 沼津支所, 主席研究員 (10270547)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | LPCAT1 / 抗がん剤 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
LPCAT1は生体膜リン脂質生合成における代表的なホスファチジルコリン生合成酵素であり、近年になりがん細胞の増殖においても重要な役割を果たしていることが明らかになりつつある。
昨年度はLPCAT1阻害剤の探索において384-wellプレートを使用した簡便な系で1次スクリーニングを行っていたが、偽陽性が多いことが判明し1次スクリーニングからMSを用いた精密なスクリーニング系でサンプルのLPCAT1阻害活性を解析することとした。MSを用いたスクリーニングはスループットが悪いという欠点があったため、スクリーニング系のブラッシュアップを行ない、全工程に要する時間をおよそ半減することができた。
本年度は放線菌、カビ、昆虫病原糸状菌類2000種の微生物代謝産物をスクリーニング源としてLPCAT1阻害剤のスクリーニングを行った。LPCAT1阻害活性が認められた微生物代謝産物は、その生産菌を大量培養し、培養液中に含まれるLPCAT1阻害活性物質の精製および構造決定を行った結果、4つのLPCAT1阻害活性を有する化合物を同定することができた。そのうちの1化合物については臨床で抗腫瘍活性が認められている化合物であり、抗腫瘍活性におけるLPCAT1阻害作用の関与について解析する予定である。
また、前立腺がん細胞2種類においてCRISPR-Cas9 を用いてLPCAT1をノックアウトしたところ、細胞増殖の低下を確認した。また、これらの細胞のリピドミクス解析を行なったところ、LPCAT1ノックアウト細胞では飽和脂肪酸を有したフォスファチジルコリンの含量が低下することを明らかにした。今後レスキュー実験を行い、LPCAT1のがん細胞増殖における寄与のメカニズムを明らかにする予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
スクリーニング、精製、構造決定は順調に進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
スクリーニング、精製、構造決定は順調に進行しているが、取得できた化合物のLPCAT1阻害活性が弱い。今後もスクリーニングを継続してより強い阻害活性を有する化合物の発見を目指す。
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| Causes of Carryover |
当初の計画では1次スクリーニングで簡便なプレートアッセイを行う予定であったが、偽陽性が多いため中止して1次スクリーニングからMSを用いた精密なスクリーニングを行なった。MSを用いた精密なスクリーニングはプレートアッセイと比較して格段にスループットが低いためスクリーニングの進行が遅れている。翌年度スクリーニングに使用する試薬等を購入する予定である。
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| Remarks |
公益財団法人微生物化学研究会 微生物化学研究所 沼津支所https://www.bikaken.or.jp/laboratories/numazu/summary.html
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