2023 Fiscal Year Research-status Report
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22K06818
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
辻 琢磨 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 特任講師 (40725628)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | リン脂質 / 不均一分布 / 偏在性分布 / 電子顕微鏡 / 凍結割断レプリカ法 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
多種多様な膜脂質がどのように細胞内に配置されているのかはほとんど明らかになっていない。急速凍結・凍結割断レプリカ標識（QF-FRL）法は生きたままの膜脂質分布を保存し、プローブと内在性分子との競合の可能性を排除し、脂質二重層の裏と表のそれぞれの層について、ナノスケールの分解能で解析することができるユニークかつ強力な方法である。本研究では、本法により出芽酵母に見出した膜脂質不均一分布について、その性質と分布の制御機構を解明する。
本年度はエイソソームにおける膜脂質局在制御機構を調べた。出芽酵母細胞膜上の凹み構造であるエイソソームは外環境や膜張力の変化に応じて形態が変化すること、また様々なトランスポーターやTORC2活性制御因子などが集積／離散することが知られているが、そのメカニズムはほとんど明らかになっていない。我々はQF-FRL法を用いることでエイソソームには周囲よりもホスファチジルイノシトール-(4,5)-二リン酸[PI(4,5)P2]が濃縮していることを見出した。PI(4,5)P2分布とエイソソームタンパク質の関係を調べるためにエイソソーム局在タンパク質の遺伝子欠損細胞株を作製し、PI(4,5)P2分布をQF-FRL法で解析したところ、PI(4,5)P2濃縮が野生型細胞よりも減弱する遺伝子欠損細胞を見出した。このタンパク質の動態を詳しく知るためにFRAPアッセイを行ったところ、興味深いことに、Pil1など他のエイソソームタンパク質と比較して高い流動性をもっていることがわかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の予定どおり遺伝子欠損株を作製し、PI(4,5)P2濃縮に異常がみられる変異株を見出した。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初の予定どおり、上記の変異株を足がかりに、どのようにPI(4,5)P2が濃縮しているのかを明らかにする。
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| Causes of Carryover |
次年度使用額が生じたが研究の遂行に支障はなく、令和6年度予算と合わせて消耗品購入に使用する。
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