2023 Fiscal Year Research-status Report
電位依存性プロトンチャネルHv1/VSOPによる酸化ストレス抑制機能の解明
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22K06829
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
大河内 善史 大阪大学, 大学院医学系研究科, 准教授 (90435818)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | プロトンチャネル / 酸化ストレス / グリコシル化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Hv1/VSOPによる酸化ストレスを制御する機構を明らかにするために、前年度に引き続き、Hv1/VSOPがNADPHオキシダーゼを制御する機構に着目して実験を行った。WTとHv1/VSOP-KOマウスから単離した好中球の細胞膜上に局在するNADPHオキシダーゼの量を、無刺激条件下において、ビオチン化法による膜表面に局在するNADPHオキシダーゼを回収することで調べた。その結果、非常に弱いがNADPHオキシダーゼのシグナルを検出することができた。
Hv1/VSOPの酸化抑制機能を調べる目的で、ウニHv1/VSOPに着目した。ウニHv1/VSOPは哺乳類を含めた他の生物とは異なり、N-結合型グリコシル化に必須のコンセンサス配列を持っていることから、グリコシル化を指標に酸化ストレス制御機構を明らかにできるのではないかと考えた。これまでウニHv1/VSOPがグリコシル化されることは示されていなかったことから、HEK細胞に発現させて糖鎖修飾の有無を確認した。糖鎖切断酵素の有無、グリコシル化されるアミノ酸部位に変異を導入した変異体を用いた実験から、ウニHv1/VSOPがグリコシル化されることが分かった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
無刺激条件下での好中球における膜表面に局在するNADPHオキシダーゼを検出することができたため。ウニHv1/VSOPがグリコシル化されることが分かったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続き、WTおよびHv1/VSOP-KOマウスから単離した好中球を用いて、膜表面に局在するNADPHオキシダーゼの量を定量する。ウニHv1/VSOPについてグリコシル化がチャネル活性に与える影響を調べる。
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| Causes of Carryover |
当初の予定通りに執行したが、結果として予定よりも多くの次年度使用額が生じてしまった。次年度も予定通り執行する予定であるが、計画的に予算の使用を進めていく。
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