2023 Fiscal Year Research-status Report
新規核酸アナログによるRNAウイルス感染細胞内ATP合成・局在変化制御機構の解明
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22K07092
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| Research Institution | Microbial Chemistry Research Foundation |
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Principal Investigator |
滝沢 直己 公益財団法人微生物化学研究会, 微生物化学研究所, 主任研究員 (50448502)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | 抗ウイルス薬 / RNAウイルス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
methyl-thio-formycin（SMeFM）のインフルエンザウイルス増殖阻害活性について詳細な解析を行った結果、ウイルス増殖を阻害する増殖過程を同定した。また、SMeFMはde novo purine生合成系を阻害してATP合成を阻害すると考えられるが抗ウイルス作用を発揮する分子機構については不明であった。このことから、SMeFM添加細胞における細胞応答について解析を行った結果、SMeFMの添加によりシグナル伝達が阻害される経路を発見した。SMeFM添加により細胞内ATP量が減少するよりも早い時間で抗ウイルス活性が発揮されることから考え、SMeFMの抗ウイルス活性はシグナル伝達経路の阻害によるもたらされると考えられる。ATPセンターであるMaLionGを発現するMDCK細胞を用いてSMeFM処理細胞の細胞内ATP局在について検討を行ったが、SMeFM非処理細胞と比較して細胞内ATP局在に変化は見られなかった。この結果もSMeFMの抗ウイルス活性はシグナル伝達経路の阻害であるという仮説を支持する結果であると考えられる。次に、SMeFMについてインフルエンザウイルス以外のウイルスに対する増殖阻害活性を検討した結果、SMeFM処理により増殖に影響を受けるウイルスと受けないウイルスがあることが明らかとなった。インフルエンザウイルスを含めSMeFMが増殖を阻害したウイルスで共通する点について検討を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
Methyl-thio-formycin処理細胞内のATP局在について変化が見られなかったが、抗ウイルス活性の作用機序解明は順調に進んでいる。de novoのATP合成系阻害によるシグナル伝達阻害がmethyl-thio-formycinの抗ウイルス活性の最上流であることが明らかとなってきているので、de novo ATP合成とシグナル伝達の関係についてimagingの手法も取り入れて進める予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
de novoのATP合成系阻害によるシグナル伝達阻害がmethyl-thio-formycinの抗ウイルス活性の最上流であることが明らかとなってきているので、methyl-thio-formycinのターゲット候補因子についてknock-outやドミナントネガティブ体発現細胞を作成し、作成した細胞におけるmethyl-thio-formycinの抗ウイルス活性について測定する。また、作成した細胞内のATP局在についても検討を行う。
methyl-thio-formcinによって阻害されるシグナル経路の下流についても検討を行い、抗ウイルス活性が発揮される作用点についても解析を進める。methyl-thio-formycin処理により阻害されるインフルエンザウイルスの増殖段階は同定済みであるので、その段階に関わる宿主側因子を中心にmethyl-thio-formycinのより阻害されるシグナル経路との関連を明らかとする。
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| Causes of Carryover |
目的薬剤の処理細胞および感染細胞のメタボローム解析の外注を予定していたが（約75万）、研究の進展により目的薬剤が阻害するシグナル経路を発見したので予定していた外注を中止し、本年度のマウス解析や論文出版費として使用するため次年度使用額が生じた。繰越分は上記の通り目的薬剤のマウスにおける抗ウイルス活性評価の実験や論文出版費として使用する予定である。
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