2023 Fiscal Year Research-status Report
αシヌクレイン過剰発現マウスを用いたαシヌクレインの機能と病態解析
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22K07376
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
鈴木 ちぐれ 順天堂大学, 医学部, 特任准教授 (40536629)
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2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | α シヌクレイン過剰発現 / カテプシンD欠損マウス / 脳組織形態 / 超微形態解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
αシヌクレインは神経細胞のシナプス終末に局在する機能が未解明のタンパク質でリン酸化αシヌクレインの蓄積と神経疾患の関係が注目されている。申請者らの先行研究では、リソソーム酵素であるカテプシンDを神経細胞特異的に欠損させたマウス(CtsD-Nes)の脳内でリン酸化αシヌクレインが蓄積していた。そこで、αシヌクレインの正常機能と病態時の神経病理像の検証のため、正常αシヌクレイン過剰発現型（hSNCA-mKate2）・CtsD-Nesマウスを作成した。本研究の目的は、① hSNCA-mKate2マウスにより、正常脳・神経におけるαシヌクレインの細胞内局在と超微形態を明らかにし、② hSNCA-mKate2-CtsD-Nesマウスで、オートファジー・リソソーム分解機構とαシヌクレインの関連を組織形態学的に解明する事である。実験計画① hSNCA-mKate2マウスの形態学的解析（令和４年度）：については、高感度免疫電顕(In-resin CLEM)にてmKate2集積部にシナプス小胞集積が確認された世界初のIn-resin CLEM可能なマウスとして第128回解剖学会総会・全国学術集会にてポスター発表を行った。また、正常ヒトαシヌクレインの過剰発現は神経変性を誘導せず、シナプス終末部にて小胞のプールに関与することを形態学的に証明することができた。結果について、現在論文執筆中である。
実験計画② hSNCA-mKate2-CtsD-Nesマウスを用いた解析（令和４‐６年度）：については、hSNCA-mKate2-CtsD-Nes はCtsD-Nesと同様生後20日ごろより徐々に進行する神経症状と体重減少を示している。hSNCA-mKate2-CtsD-Nesでは、生後20日前後の視床の蛍光顕微鏡による観察にてmKate2陽性顆粒を取り込んだミクログリアやその周囲にアストロサイトを多数認めている。第129回日本解剖学会総会・全国学術集会にてポスター発表をした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
② SNCA-mKate2-CtsD-Nesマウスを用いた解析（令和４‐６年度）：について、当大学動物舎の工事に伴い飼育数の縮小を余儀なくされたこともありhSNCA-mKate2-CtsD-Nesマウスの必要の準備が滞っていた。日齢や免疫染色の条件などIn-resin-CLEMの条件検討に相当数の固体を必要とした。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在は、hSNCA-mKate2-CtsD-Nesの飼育も従来通り行えるようになっており実験に必要な個体を増産中である。今後、課題②についてIn-resin CLEMによるmKate2陽性顆粒とミクログリア、アストロサイトの関係やリソソーム分解系の関与について解析を進めていく。
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| Causes of Carryover |
研究の進行が予定よりも遅れたため使用額が少なかった。今後の実験に必要な消耗品などの購入のため次年度に使用したい。
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