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2022 Fiscal Year Research-status Report

Elucidation of the pathogenesis of wild-type ATTR amyloidosis, especially focusing on autoimmune mechanism

Research Project

Project/Area Number 22K07393
Research InstitutionShinshu University

Principal Investigator

関島 良樹  信州大学, 学術研究院医学系, 教授 (60322715)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 佐藤 充人  信州大学, 医学部, 特任助教 (10816630)
Project Period (FY) 2022-04-01 – 2025-03-31
Keywordsアミロイド / トランスサイレチン / ATTRアミロイドーシス / 自己抗体
Outline of Annual Research Achievements

同意の得られた健常人12名、ATTRwtアミロイドーシス患者35名、非ATTRwtアミロイドーシス患者68名から血清サンプルを得た。
血清中のTTRに対する自己抗体の存在を確認するために、リコンビナントTTRをSDS-PAGEし、PVDFメンブレンに転写して血清を一次抗体としてウェスタンブロットを行なった。全長TTRではTTR monomerに相当する約14 kD付近に明らかなバンドが出現し、dimerやtrimerに相当する高位にも淡いバンドが出現した。これはTTRタンパクは本来安定的な4量体構造をとるが、それが崩れると自己の免疫機構によって異物として認識され、自己抗体が作られることを支持するものである。Shorty TTR(TTRペプチド49-127)のウェスタンブロットではmonomerに相当する約9 kDに加え,20-80 kDの範囲に複数のバンドが出現した。このバンドはshorty TTRのoligomerに対する自己抗体と考えられ、ほとんどの血清サンプルで80 kD付近に共通のバンドが出現するが、サンプルによって高位・数が異なる複数のバンドが出現した。これは体内に多様なshorty TTR oligomerが存在し、これを排除しようとするヒトの免疫機構があることを示している。ATTRwt患者群と非患者群で出現するバンドに特徴的な傾向は見出せなかった。
次に、TTRに対する自己抗体を定量的に評価するために、ELISAによる抗体価の評価系構築を試みた。間接ELISAを採用し、TTRタンパクを固相化し、血清、続けて標識ヒトIgG二次抗体を反応させ、TMB基質で発色させた。反応条件を複数検討したところ、wild TTR、shorty TTRとも有意差を持って年齢に比例して抗体価が上昇していく傾向が確認されたが、ATTRwt患者群と非患者群では有意差を認めなかった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

順調にアミロイドーシス患者および非アミロイドーシス患者からのサンプルが収集されており、ウェスタンブロットおよびELISAの実験系が確立しつつあるため。

Strategy for Future Research Activity

これまでの間接ELISAにおいて、TTRタンパクの固相化条件でサンプル間の差に変化がみられており、患者群と非患者群を差別化できる可能性があり、まずELISA反応条件の検討を行っていく。具体的には、TTRタンパク固相化の際にβ-MEなどの変性剤を用いる方法(β-ME ELISA)や、サンドイッチ法で血清を固相化し、至適な条件でTTRタンパクを反応させることで多様なoligomerをウェル中で形成させることで、ポリクローナルなTTR自己抗体の検出を目指す。また生体内で形成されるshorty TTR oligomerを特異的に認識する抗体、すなわち生体内で作成される自己抗体と同様なエピトープを認識する抗体の作成を行う。そのためには単純なタンパクの皮下への免疫では目的とする抗体が形成されない可能性があるため、shorty TTRのcDNAを含む発現ベクターを作製し、ベクターを免疫動物に直接投与するDNA免疫法を用いる予定である。

Causes of Carryover

当初の計画で見込んだより安価に研究が進んだ為、次年度使用額が生じた。

  • Research Products

    (21 results)

All 2022

All Journal Article (8 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results,  Peer Reviewed: 7 results) Presentation (12 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results,  Invited: 7 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] Guidelines and new directions in the therapy and monitoring of ATTRv amyloidosis2022

    • Author(s)
      Ando Y, Adams D, Benson MD, Berk JL, Plant-Bordeneuve V, Coelho T, Conceicao I, Ericzon BG, Obici L, Rapezzi C, Sekijima Y, Ueda M, Palladini G, Merlini Gi
    • Journal Title

      Amyloid

      Volume: 29 Pages: 143-155

    • DOI

      10.1080/13506129.2022.2052838

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Amyloid nomenclature 2022: update, novel proteins, and recommendations by the International Society of Amyloidosis (ISA) Nomenclature Committee2022

    • Author(s)
      Buxbaum JN, Dispenzieri A, Eisenberg DS, Fandrich M, Merlini G, Saraiva MJM, Sekijima Y, Westermark P
    • Journal Title

      Amyloid

      Volume: 29 Pages: 213-219

    • DOI

      10.1080/13506129.2022.2147636

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Novel histopathological deposition patterns of EGF-containing fibulin-likeextracellular matrix protein 1 amyloidosis: an autopsy case exhibiting a possibleassociation between AEFEMP1 amyloidosis and elastic fibres2022

    • Author(s)
      Ichimata S, Hata Y, Katoh N, Kametani F, Yazaki M, Sekijima Y, Nishida N
    • Journal Title

      Amyloid

      Volume: 29 Pages: 139-140

    • DOI

      10.1080/13506129.2021.2020754

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Somatostatin-derived amyloid deposition associated with duodenal neuroendocrine tumour (NET): a report of novel localised amyloidosis associated with NET2022

    • Author(s)
      Ichimata S, Katoh N, Abe R, Yoshinaga T, Kametani F, Yazaki M, Kusama Y, Sano K, Uehara T, Sekijima Y
    • Journal Title

      Amyloid

      Volume: 29 Pages: 64-65

    • DOI

      10.1080/13506129.2021.1979513

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] AH amyloid neuropathy: a novel clinical phenotype confirmed by histopathology and mass spectrometry2022

    • Author(s)
      Ohashi N, Katoh N, Kasuga K, Yoshinaga T, Kametani F, Yazaki M, Sekijima Y
    • Journal Title

      Amyloid

      Volume: 29 Pages: 141-142

    • DOI

      10.1080/13506129.2022.2049745

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] CSF/plasma levels, transthyretin stabilisation and safety of multiple doses of tolcapone in subjects with hereditary ATTR amyloidosis2022

    • Author(s)
      Takahashi Y, Ohashi N, Takasone K, Yoshinaga T, Yazaki M, Roberts M, Glidden PF, Sekijima Y
    • Journal Title

      Amyloid

      Volume: 29 Pages: 190-196

    • DOI

      10.1080/13506129.2022.2056011

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Therapeutic Outcome of Lenalidomide-dexamethasone in Patients with Relapsed or Refractory Systemic Immunoglobulin Light Chain (AL) Amyloidosis : A Single-center Analysis and Review of the Literature2022

    • Author(s)
      Ueno A,Katoh N,Ezawa N,Yoshinaga T,Yazaki M,Sekijima Y
    • Journal Title

      Shinshu Med J

      Volume: 70 Pages: 29-38

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] 核酸医薬を用いたトランスサイレンチン型アミロイドーシス治療2022

    • Author(s)
      関島良樹
    • Journal Title

      DEMENTIA JAPAN

      Volume: 36 Pages: 258-264

  • [Presentation] アルツハイマー病以外の疾患に対するPiB-PETの有用性2022

    • Author(s)
      関島良樹
    • Organizer
      第14回関東脳核医学研究会 - KBNM -
    • Invited
  • [Presentation] 早期治療介入を見据えた病態理解と診断のポイント2022

    • Author(s)
      関島良樹
    • Organizer
      第63回日本神経学会学術大会
    • Invited
  • [Presentation] ATTRアミロイドーシスの最新の治療戦略2022

    • Author(s)
      関島良樹
    • Organizer
      第63回日本神経学会学術大会
    • Invited
  • [Presentation] HELIOS-A:Study of Vutrisiran in Patients with Hereditary transthyretin-madiated(hATTR) Amyloidosis2022

    • Author(s)
      Sekijima Y,D Adams,Il Tournev,Ms Taylor,T Coelho,V Plante-bordeneuve,Jl Berk,A Gonzalez-duarte,Jd Gillmore,Sc Low,L Obici,C Chen,P Badri,S Arum,J Vest,M Polydefkis
    • Organizer
      第63回日本神経学会学術大会
  • [Presentation] ATTRアミロイドーシスの病理・病態に迫る  ―QOL・生命予後改善を目指して―2022

    • Author(s)
      関島良樹
    • Organizer
      第63回日本神経病理学会総会学術研究会
    • Invited
  • [Presentation] これからのATTRvアミロイドーシス診療を考える2022

    • Author(s)
      関島良樹
    • Organizer
      第9回日本アミロイドーシス学会学術集会
    • Invited
  • [Presentation] 遺伝性ATTRアミロイドーシス治療の最前線2022

    • Author(s)
      関島良樹
    • Organizer
      第40回日本神経治療学会学術集会
    • Invited
  • [Presentation] RNAi薬のATTRvアミロイドーシスへの治療効果判定に対するNfLの有用性2022

    • Author(s)
      関島良樹
    • Organizer
      第40回日本神経治療学会学術集会
    • Invited
  • [Presentation] Progression and distribution pattern of cerebral amyloid angiopathy in hereditary ATTR amyloidosis patients visualized by 11C-PiB-PET imaging2022

    • Author(s)
      Takahashi Y, Oguchi K, Mochizuki Y, Takasone K, Ezawa N, Matsushima A, Katoh N, Yazaki M, Sekijima Y
    • Organizer
      XVⅢInternational Symposium On Amyloidosis
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Reduction of cardiac AL amyloid deposition after complete response visualized by PiB-PET imaging2022

    • Author(s)
      Katoh N, Oguchi K, Mochizuki Y, Takahashi Y,Ueno A, Takasone K, Sekijima Y
    • Organizer
      XVⅢ International Symposium On Amyloidosis
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Siblings with a novel type of amyloid neuropathy,hereditary Aβ2M amyloid neuropathy:Report of the second family in the world2022

    • Author(s)
      Katoh N,Yoshinaga T, Yazaki M, Kusaba T, Yamano T, Miyagawa-Hayashino A, Sekijima Y
    • Organizer
      XVⅢ International Symposium On Amyloidosis
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] ATTR型脳アミロイドアンギオパチーの臨床的特徴およびアミロイド沈着の分布と進展2022

    • Author(s)
      高橋佑介、小口和浩、望月祐介、高曽根健、江澤直樹、松嶋聡、加藤修明、矢崎正英、関島良樹
    • Organizer
      第41回日本認知症学会学術集会/ 第37回日本老年精神医学会 合同開催
  • [Book] 今日の治療方針 私はこう治療している2022

    • Author(s)
      関島良樹
    • Total Pages
      2
    • Publisher
      医学書院

URL: 

Published: 2023-12-25  

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