臨床検体からの抗原直接検出による薬剤耐性菌の迅速検査法の開発と臨床評価

2023 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 22K07394
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 松村 康史 京都大学, 医学研究科, 准教授 (80726828)
• Project Period (FY): 2022-04-01 – 2025-03-31
• Keywords: 薬剤耐性菌迅速検出 / ELISA / ESBL

Outline of Annual Research Achievements

市中・院内感染症の主要な原因菌である腸内細菌目細菌に対する第3世代セファロスポリンへの耐性が急増しているが、適切な迅速診断法が存在しない。本研究は、研究１．臨床検体から直接、薬剤耐性腸内細菌科目を検出できる全自動迅速3GC耐性因子抗原定量検査法の開発と、研究２．臨床検体を用いた前向き検討により、上記検査法の精度と臨床的有用性の評価に分けられる。研究１の開発フェーズにおいては、1.1.基礎実験と1.2.模擬検体を用いた検証を行う計画であった。２０２２年度は基礎実験を終えて模擬検体と全自動装置を用いた検討を開始した。２０２３年度は、ELISA（サンドイッチ法）自動化で必要なモノクローナル抗体の作成、PCR自動化機器のELISA（サンドイッチ法）への対応を製造企業と連携して進めた。まず抗体については、第3世代セファロスポリン耐性因子として、最も頻度が高く80％以上を占めるESBLのうち、CTX-Mをターゲットとした。それぞれ1, 2, 9, 8/25のサブタイプを有することを全ゲノム解析で決定されている臨床分離株10株、ESBL陰性のコントロール用リファレンス株1株を用いて、これらのサブタイプをすべて検出可能なモノクローナル抗体の網羅的スクリーニングを行った。自動化については、製造企業において蛍光強度の検出についてセンサーやソフトウェアの調整に時間を要しており、現時点では模擬検体の検査の実施には至っていない。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

研究の進行予定では、２０２３年度に1.2.模擬検体と全自動機器の開発を完了し、2.臨床的検討に進む予定であったが、全自動検出機器の調整に時間を要し開発が完了できなかったため、計画よりもやや遅れていると判断した。

Strategy for Future Research Activity

２０２４年度は、２０２３年の遅れを取り戻せるよう機器の調整を製造企業と連携し促進し、調整完了後速やかに2.臨床的検討がスタートできるよう配慮して進行する。

Causes of Carryover

研究計画の遅れのため、臨床的検討に必要な経費を持ち越したため、２０２４年度に執行予定です。