2022 Fiscal Year Research-status Report
Elucidation of the involvement of RNA methylation in impairment of fear memory extinction in PTSD and development of a new therapy
| Project/Area Number |
22K07568
|
|---|
| Research Institution | Kibi International University |
|---|
Principal Investigator |
森信 繁 吉備国際大学, 保健医療福祉学部, 教授 (30191042)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
淵上 学 広島大学, 医系科学研究科(医), 講師 (40403571)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
|
| Keywords | PTSD / N6-methyladenosine / METTL / FTO / ALKBH5 / 恐怖記憶の消去 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
ラットの海馬から抽出したtotal RNAを対象にRNAメチル化の計測に該当する、N6-methyladenosine (m6A)の計測をEpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit （EpigenteK社）を用いて行ったが、再現性に乏しく定量に適していない事がわかった。このためRNAのdenatureやNuclease Pによる断片化などRNAメチル化計測についての前処理を行ってm6Aを計測する、N6-Methyladenosine ELISA Kit (Cell Biolabs)を用いた計測法に方法を変えている。このため現時点ではまだ、具体的なSPSラット海馬のRNAメチル化の障害についてはデータが得られていない。
RNAメチル化―脱メチル化反応を司る酵素である、METTL3, 14 mRNAやFTO, ALKBH5 mRNAの発現は、real-time PCR法を用いて計測を行っており、SPS処置後にラット海馬のMETTL3, 14の有意な発現増大が得られている。同じくSPS処置後のラット海馬のFTO, ALKBH5 mRNAには有意な発現の差はみられていない・
SPS負荷ラットを用いた、恐怖記憶の消去障害はContextual fear conditioningとextinction trainingによって行動学的に得られおり、N6-methyladenosineの計測やRNAメチル化ー脱メチル化反応を司る酵素のための計測用サンプルは作製できている。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当初用いる計画であったN6-methyladenosine計測用のEpigenteK社のキットの再現性に問題があり、このためCell Biolabs社の計測用キットに変えたために、研究状況に軽度の遅れが出ている。
|
| Strategy for Future Research Activity |
早急にN6-methyladenosineの計測方法を構築して、当初の研究計画に従って恐怖記憶の消去の障害に関与するRNAメチル化障害の実態や機序を解明する。
|
