2022 Fiscal Year Research-status Report

Investigation of virus RNA analysis using FFPE specimens to clarify the pathogenesis of acute rupture of chodae tendineae of the mitral valve in infants

Research Project

Project/Area Number	22K07883
Research Institution	National Cardiovascular Center Research Institute
Principal Investigator	黒嵜健一国立研究開発法人国立循環器病研究センター, 病院, 部長 (40561460)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	池田善彦国立研究開発法人国立循環器病研究センター, 病院, 医長 (30393242) 白井学国立研究開発法人国立循環器病研究センター, オープンイノベーションセンター, 室長 (70294121) 白石公国立研究開発法人国立循環器病研究センター, 病院, 客員研究員 (80295659)
Project Period (FY)	2022-04-01 – 2025-03-31
Keywords	乳児特発性僧帽弁腱索断裂 / 腱索断裂 / 急性心不全 / 抗SSA抗体 / 川崎病 / 心内膜炎 / ウイルス
Outline of Annual Research Achievements	乳児特発性僧帽弁腱索断裂における僧帽弁および腱索の心内膜には、単核球を中心とした炎症細胞浸潤が認められ(Shiraishi et al., Circulation 2014;130:1053)、病因としてウイルス感染、川崎病、母親由来の抗SSA抗体などが示唆されている。本疾患は発症が年間10数例と希少で、また搬送直後に手術に向かうために、病因解明のための新鮮サンプルの収集が困難である。そこで我々は、過去の病理組織標本から最新の遺伝子工学的手法を駆使して、本疾患の病態と病因解明を試みた。[対象と方法]僧帽弁置換した腱索断裂乳児４例(断裂群：生後3-6ヶ月(中央値4ヶ月)、川崎病およびSSA抗体陽性例を除く)と弁置換した先天性心疾患２例(対照群：生後11および13ヶ月)のパラフィン包埋された僧帽弁および腱索標本の切片を高感度ISH法にて解析した。[結果]前回の研究で行った病原微生物の検索を目的としたメタトランスクリプトーム解析では、断裂群４例中２例に小児に一般的な感染症を引き起こすDNA virus Xに高い相補性が検出された。そこで今回は、高感度ISH法(RNAscope)を行ったとところ、断裂群の組織片に心内膜を主体とするDNAvirus X（未発表にてXとする）のRNAシグナルが確認された。[考察]本疾患では僧帽弁および腱索に何らかの炎症と免疫応答が存在すること、引き金として、一般的に小児に発疹と感冒症状をきたすDNAvirus Xが関与することが示唆された。今後は患者の入院時の血液や咽頭拭い液などの新鮮なサンプルを解析し、virus Xの関与を検証する予定である。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 高感度ISH法(RNAscope)を上記以外の本症例の患者の僧帽弁及び腱索組織において実施したが、数例で同種のvirus RNAが心内膜を中心に検出された。これらの所見より、本疾患にこのvirusが何らかの関与をしていることが強く示唆される所見を得た。今後は他の心内膜心筋炎をきたすウイルスが関与していないかどうかの検討を実施する。
Strategy for Future Research Activity	DNAvirus Xが本疾患に特異的なものであるのかどうかを検証する。心筋心内膜炎を引き起こすことが知られているEnterovirus、特にCoxakie virus, Echo virusなどのプローブを用いて、高感度ISHを繰り返す予定である。また新たな症例が出たら、できるだけ新鮮な組織切片よりISHを行い、ウイルスの関与について小生に完投する予定である。これらの点が証明されたら、論文にまとめる予定である。
Causes of Carryover	次年度にはEcho virusやCockxie virusなどの心筋心内膜炎を引き起こすウイルスの関与について詳細に調べる予定。ウイルスモノクローナル抗体や高感度ISHにかかる費用が高価であるため、次年度に繰り越すこととした。次年度の研究費と合わせると、これらの検索が十分に行える予定である。