2022 Fiscal Year Research-status Report
Characterization of PLAGL1-FOXO1 fusion gene in alveolar rhabdomyosarcoma
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22K07940
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
宮地 充 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (40584983)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
家原 知子 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20285266)
土屋 邦彦 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (90381938)
菊地 顕 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任講師 (40453104)
吉田 秀樹 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10643546)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | 横紋筋肉腫 / PLAGL1 / FOXO1 / 融合遺伝子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
令和4年度は、まず、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子の全長をPCR増幅し、クローニングした。クローニングされたPLAGL1-FOXO1融合遺伝子の全長の配列が正しい配列であることをSangerシーケンスにて確認した。次にPLAGL1-FOXO1融合遺伝子をGFPベクターにサブクローニングし、293細胞株にトランスフェクションし、細胞内局在を確認した。蛍光顕微鏡で観察したところ、コントロールベクターを導入した細胞では、細胞全体に蛍光を認めたのに対して、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子をサブクローニングしたGFPベクターを導入した細胞では蛍光が核内に局在していることが確認された。PLAGL1-FOXO1融合遺伝子は、PLAGL1遺伝子のDNA結合ドメインが保持されていることから、核内の局在が予想され、予想と合致した結果であった。FLAGベクターにもPLAGL1-FOXO1融合遺伝子をサブクローニングし、293細胞株に強制発現させたが、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子の塩基長が長いためか、トランスフェクション効率が悪く、ウエスタンブロッティング法によるPLAGL1-FOXO1タンパクの同定には至らなかった。マウス筋芽細胞株であるC2C12細胞株やマウス線維芽細胞株である3T3細胞株のPLAGL1-FOXO1安定発現細胞株を作成するため、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子をMSCVベクターにサブクローニングし、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子の全長の配列が正しい配列であることをSangerシーケンスにて確認した。令和5年度以降、このベクターを用いて、C2C12細胞株や3T3細胞株のPLAGL1-FOXO1安定発現細胞株を作成し、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子の機能解析を行う。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
PALGL1-FOXO1融合遺伝子のクローニング、ベクターへのサブクローニングに時間を要し、やや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和5年度以降、MSCVベクターを用いて、C2C12細胞株や3T3細胞株のPLAGL1-FOXO1安定発現細胞株を作成し、PLAGL1-FOXO1融合遺伝子の機能解析を行う。
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| Causes of Carryover |
研究の進捗がやや遅延したため、次年度使用額が生じた。令和5年度以降の計画において、研究を予定通り進捗させ、翌年度分として請求した助成金と合わせて、適切に使用する。
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