2022 Fiscal Year Research-status Report
脂肪組織由来間葉系前駆細胞を用いたリンパ浮腫に対するリンパ管新生療法の開発研究
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22K08201
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
清水 優樹 名古屋大学, 医学系研究科, 助教 (90801887)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
室原 豊明 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (90299503)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | リンパ浮腫 / 治療的リンパ管新生 / 前臨床試験 / ミトコンドリア |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（課題１）中型・大型動物モデルを用いた前臨床試験
２次性リンパ浮腫の臨床上の疫学や現状の治療、課題について文献を調査し、さらには、リンパ浮腫に対するリンパ管新生のトランスレーショナルリサーチ、ウサギ、ブタリンパ浮腫モデルの確立についての資料収集を行った。結果は総説として纏め、筆頭著者（責任著者兼任）として国際論文に投稿。
（課題２）マウス尾部リンパ浮腫モデルにおける治療機序解明
ADRCを用いたリンパ管新生療法の新規治療機序の解明について、in vitroの実験を行った。血管内皮細胞に対して、positive controlとしてのミトコンドリア（ホモジナイズド法により分離）を投与し、血管内皮細胞に外来ミトコンドリアが取り込まれるか、またその機序を検証する目的で、エンドサイトーシス阻害剤（マクロピノサイトーシス阻害）にて取り込みが低下するか否かを検証した。次に、血管内皮細胞にミトコンドリアを投与した際に、血管新生機能（増殖能、管腔形成能、遊走能）がそれぞれ亢進するかWST-1 proliferation assay, Matrigel tube-formation assay, Boyden chamber migration assayを用いて評価検討した。これらから、ミトコンドリアの受け取りにより、血管内皮細胞の増殖能の亢進、管腔形性能の亢進、遊走能の亢進などの血管新生促進の結果が得られた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
課題１はやや遅れているものの、課題２は新規知見が得られた為。
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| Strategy for Future Research Activity |
（課題１）中型・大型動物モデルを用いた前臨床試験
ウサギ及びブタを使用して、リンパ管を分断することによりヒトの病態を模倣した2次性リンパ浮腫モデルを作成する。ウサギでは耳部に0.2mlの1％エバンスブルー色素染料の皮内注射によってリンパ管を同定ののち、リンパ管を切除する。ブタでは、リンパ節から遠位と近位の両方に排出される集合リンパ管を3cm片で切除することにより、鼠径部のリンパ管網を分断し２次性リンパ浮腫を誘導する。これらの方法により作成したリンパ浮腫モデルに対して、浮腫組織の厚みや周囲径の計測、MRIを用いたパラメータにより、リンパ浮腫の定量評価を行う。手術前、手術後1日目、及び第1、2、3、4週間後における経時的な変化を測定する。 上記リンパ浮腫モデルに対して、ウサギあるいはブタの双方それぞれより分離調整されたADRCを、リンパ浮腫近位部（リンパ管ネットワーク不全部位）に移植（１匹あたり１x108個を筋注法で１０箇所程度に移植）する。なお、研究代表者らは、ウサギ及びブタからのADRC分離に関しては、既に実験手技・技術は確立済みである。
ADRC移植後のリンパ浮腫改善経過は、経時的に前述の評価項目を用いて評価し、コントロール群と比較検討する。
（課題２）マウス尾部リンパ浮腫モデルにおける治療機序解明
ADRCとLECを共培養し、ミトコンドリアトランスファー阻害剤（既報のCytochalasin Dなど）で、阻害することにより、ADRCのLECに対するリンパ管新生機能促進効果が減弱するか否かを検討する。 また、その際に、外部からのミトコンドリアの受け取りによりLEC内ではどのようなシグナルが働き、リンパ管新生効果を発揮しているのかを gene arrayを用いて網羅的に検討する。
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