2023 Fiscal Year Research-status Report
The study of the effectiveness of TFL knock out CART cell
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22K08453
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
皆川 健太郎 神戸大学, 医学研究科, 医学研究員 (80432574)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
若橋 宣 神戸大学, 医学研究科, 医学研究員 (80596651)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2027-03-31
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| Keywords | TFL / Regnase4 / CRISPR-Cas9 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
キメラ抗原受容体（CAR）T細胞は、再発・難治性の白血病の根治治療に有効であることが示されています。T細胞の枯渇は、CAR-T細胞が反応しない問題の1つです。私たちは最近、ミエロイド抗原CD33をターゲットにしたCAR-TをAML治療のために開発しました。これは第三世代のCARで、標的抗原を認識した後、強固な活性化に寄与します。このCAR-Tは、過剰なCAR-T細胞の増殖を無効にする安全性の高い自殺スイッチを備えています。今回、マウスモデルでその有効性が確認され、今後の遺伝子改変細胞による臨床効果が期待されます。 私たちはこれまでに、リンパ腫患者の染色体転座から「トランスフォームド・フォリキュラー・リンパ腫（TFL）」と呼ばれる新規遺伝子を発見しています。この遺伝子は、ZC3H12Dとしても知られており、RNaseモチーフを持ち、そのRNAの3'非翻訳領域（UTR）を通じていくつかのサイトカインを分解することが明らかになっている。私たちは、TFLがT細胞で発現し、活性化するとその発現量が増加すること、また、TFL欠損マウスは実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）を誘発した後、炎症が長期化することを発見しました。最近、他の研究者が、TFLは顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）陽性エフェクターメモリー（TEM）CD4 T細胞では低いレベルで発現していることを発見した。GM-CSFは、EAEなどの慢性炎症疾患の発症および維持に関与していると考えられており、TEMは他のT細胞サブセットと比較して最も高いレベルのGM-CSFを発現している。本研究では、TFLを欠失させたCAR-T細胞がin vivoでの殺癌活性を高めるかどうかを評価したいと考えています。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
現段階でTFLのノックダウンされたT細胞を作成することはCRISPRシステムを用いて可能となっており、DNAレベルでの90％以上のノックダウン効率を確認できた。次にタンパクレベルでのノックダウン効率の検証をフローサイトメトリーやウェスタンブロッティング方などを用いて現在行っている。十分にノックダウンされたT細胞の作成を待って、CARTの作成に取り掛かる。
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| Strategy for Future Research Activity |
CART細胞においてTFLのノックダウンされたものとそうでないものとの比較を行うことで、抗腫瘍活性について検討する。また、種々の細胞表面マーカーを用いてメモリー細胞の増殖の有無を確認する。
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| Causes of Carryover |
我々は得られた研究結果を基にさらに研究を進めていく予定であり、そのために経費は使用される。また、学会発表のための渡航費なども含まれる。
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