2023 Fiscal Year Research-status Report
Therapeutic strategies for connective tissue diseases by targeting the autophagy-lysosomal pathway
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22K08567
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
吉見 竜介 横浜市立大学, 医学部, 講師 (70585265)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中島 秀明 横浜市立大学, 医学研究科, 教授 (30217723)
桐野 洋平 横浜市立大学, 医学部, 講師 (50468154)
峯岸 薫 横浜市立大学, 附属病院, 助教 (40616877)
國下 洋輔 横浜市立大学, 医学研究科, 客員研究員 (30849972)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | オートファジー / リソソーム / TRIM / 膠原病 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
膠原病疾患の主因は自己免疫反応による炎症であると推測されるが，その発症機序は不明である．TRIMファミリータンパクのひとつであるTRIM21は膠原病疾患でみられるI型インターフェロンの過剰産生やB細胞の分化亢進に対して抑制作用をもつ．そこで本研究では，膠原病疾患における①オートファジー関連分子の発現プロファイル，② オートファジー活性化とTRIMファミリー発現量の関連，③ TRIM21によるオートファジー制御の分子機構，の3点を調べ，TRIMファミリーによるオートファジー制御作用の膠原病病態での役割を解明するとともに，④ オートファジー制御薬による病態の変化を調べることによって，オートファジー制御薬の膠原病治療への応用の可能性を検討している．まず，ヒト単球系細胞株THP-1に発現ベクターやsiRNAを導入してTRIMファミリーの発現を変化させ，蛍光免疫染色法によってLC3の輝点数を，ウェスタンブロット法によってLC3-Ⅱ量をそれぞれ測定し，オートファジー活性の変化を調べる実験系を構築した．次に，全身性エリテマトーデス，シェーグレン症候群，全身性強皮症，皮膚筋炎の患者および健常コントールの各5名ずつより得られた血液検体より単球，CD4+ T細胞，CD8+ T細胞，B細胞を magnetic cell sorting 法で分離し，各血球細胞よりcDNAを作成し，各疾患におけるオートファジー関連分子およびTRIMファミリーの発現量の測定を開始した．また，現在Trim21欠失MRL/lprマウスおよび野生型MRL/lprマウスの脾細胞より単球，CD4＋T細胞、CD8＋T細胞，B細胞をMagnetic cell sorting法で分離し，各血球細胞におけるLC3-Ⅱおよびp62の量をウエスタンブロット法で測定中である．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度は本研究に必要な実験系の確立を目標とし，その目標を達成した．二年目は，患者検体の収集およびcDNAの作成が完了して解析を介するとともに，遺伝子改変マウスを用いた研究も開始しており，おおむね順調に研究が進行している．
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| Strategy for Future Research Activity |
全身性エリテマトーデス，シェーグレン症候群，全身性強皮症，皮膚筋炎の各疾患患者由来の各血球細胞より得られたcDNAについて，RT2 Profiler PCR Array System（SABiosciences社）を用いたオートファジー関連分子の発現の網羅的な測定を完了する．また，作製したcDNAを用いてTRIMファミリーの発現をPCR Array によって網羅的に測定し，オートファジー関連分子とTRIMファミリーの発現量の関連性の解析を完了する．各疾患で健常者と比べて発現量に変化がみられたTRIM分子について，ヒト単球系細胞株THP-1およびB細胞系細胞株NALM-6に発現ベクターやsiRNAを導入して発現量を増減させ，オートファジー関連分子の発現量が影響を受けるかをRT-PCR法やウェスタンブロット法で調べる．さらに，これらの細胞において蛍光免疫染色法によってLC3の輝点数を，ウェスタンブロット法によってLC3-Ⅱ量をそれぞれ測定し，オートファジー活性の変化を調べる．Trim21欠失MRL/lprおよび野生型MRL/lprの脾臓から採取した各免疫細胞におけるオートファジー関連分子の発現量やオートファジーの活性化の程度の測定を完了する．さらに，TRIM21との相互作用が報告されているp62，LC3などのオートファジー関連分子について，発現量やタンパク間相互作用の変化をウェスタンブロット法や免疫沈降法で解析する．最後にTrim21欠失MRL/lprおよび野生型MRL/lprの両マウスにオートファジーを活性化するmTORC1阻害剤ラパマイシンやオートファジーを阻害しうるリソソーム抑制薬ヒドロキシクロロキンを投与し，各薬剤がループス病態へ与える影響を観察して本研究テーマを終了する予定である．
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[Presentation] 全身性エリテマトーデスにおける共同意思決定と医師への信頼度の関連についての前向きコホート研究：TRUMP2-SLE研究2023
Author(s)
吉見竜介, 矢嶋宣幸, 栗田宜明, 秀川智春, 櫻井菜月, 小黒奈緒, 志田原健太, 林啓悟, 市川貴規, 岸田大, 宮脇義亜, 佐田憲映, 下島恭弘, 石川雄一, 吉岡裕二, 國下洋輔, 岸本大河, 峯岸薫, 桐野洋平, 大野滋, 中島秀明
Organizer
第67回日本リウマチ学会総会・学術集会
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[Presentation] SLE患者における低補体血症と感染症合併の関連について(第2報) LUNAレジストリを用いた観察研究2023
Author(s)
麹谷典子, 吉見竜介, 矢嶋宣幸, 杉山裕美子, 鈴木直樹, 秀川智春, 櫻井菜月, 吉岡裕二, 國下洋輔, 岸本大河, 前田彩花, 平原理紗, 小宮孝章, 副島裕太郎, 濱田直樹, 土田奈緒美, 峯岸薫, 桐野洋平, 佐田憲映, 宮脇義亜, 一瀬邦弘, 梶山浩, 佐藤秀三, 下島恭弘, 藤原道雄, 木田節 松尾祐介, 西村啓佑, 大野滋, 中島秀明
Organizer
第67回日本リウマチ学会総会・学術集会
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[Presentation] 全身性エリテマトーデス診療における共同意思決定がLLDAS達成に与える影響 TRUMP2-SLE研究2023
Author(s)
櫻井菜月, 吉見竜介, 矢嶋宣幸, 栗田宜明, 秀川智春, 小黒奈緒, 志田原健太, 林啓悟, 市川貴規, 岸田大, 宮脇義亜, 佐田憲映, 下島恭弘, 石川雄一, 吉岡裕二, 國下洋輔, 岸本大河, 峯岸薫, 桐野洋平, 大野滋, 中島秀明
Organizer
第67回日本リウマチ学会総会・学術集会
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[Presentation] 全身性エリテマトーデスにおける再燃と肥満の関連について LUNAレジストリを用いた観察研究2023
Author(s)
鈴木直樹, 吉見竜介, 秀川智春, 矢嶋宣幸, 櫻井菜月, 麹谷典子, 國下洋輔, 吉岡裕二, 岸本大河, 前田彩花, 平原理紗, 小宮孝章, 副島裕太郎, 濱田直樹, 土田奈緒美, 峯岸薫, 桐野洋平, 佐田憲映, 宮脇義亜, 一瀬邦弘, 梶山浩, 佐藤秀三, 下島恭弘, 藤原道雄, 木田節, 松尾祐介, 山本譲, 大野滋, 中島秀明
Organizer
第67回日本リウマチ学会総会・学術集会
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[Presentation] Does shared decision-making affect the quality of life in SLE patients?: the TRUMP2-SLE s2023
Author(s)
Hidekawa C, Yoshimi R, Yajima N, Kurita N, Sakurai N, Oguro N, Shidahara K, Hayashi K, Ichikawa T, Kishida D, Miyawaki Y, Sada KE, Shimojima Y, Ishikawa Y, Yoshioka Y, Kunishita Y, Kishimoto D, Minegishi K, Kirino Y, Ohno S, Nakajima H
Organizer
第67回日本リウマチ学会総会・学術集会
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[Presentation] Effect of denosumab on bone destruction in rheumatoid arthritis in clinical practice: A prospective cohort study2023
Author(s)
KomiyaT, Yoshimi R, Kunishita Y, Kishimoto D, Sakurai N, Hidekawa C, Yoshioka Y, Suzuki N, Adachi S, Iizuka Y, Maeda A, Hirahara L, Hamada N, Tsuchida N, Soejima Y, Minegishi K, Kirino Y, Ohno S, Nakajima H
Organizer
第67回日本リウマチ学会総会・学術集会
