2022 Fiscal Year Research-status Report
Epigenetic analysis of viral and host factors for the regulation of X4 HIV-1
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22K08602
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
前田 洋助 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 准教授 (30284764)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
刈谷 龍昇 熊本大学, ヒトレトロウイルス学共同研究センター, 特任講師 (40757663)
近田 貴敬 熊本大学, ヒトレトロウイルス学共同研究センター, 特任講師 (60749711)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | HIV-1 / CCR5 / CXCR4 / エピゲノム解析 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
HIV-1の感染は、CCR5をコレセプターとして利用するR5ウイルスが感染全体で主流であるのに対し，CXCR4を利用するX4ウイルスは一部の症例の感染初期と感染後期にしか出現しないが，その機序は明らかとなっていない。我々は過去の研究から、サブタイプAEのR5ウイルスとX4ウイルスが同一個体内に共存している例があることを報告してきて、このような共存状態から、感染個体の環境の変化によりX4ウイルスがメジャー集団となることが、このようなスイッチの機序の一部ではないかと考えている。
そこで本研究では、このようなX4ウイルス複製の生体内での抑圧と感染後期での増大機序について，ウイルス側とともに宿主側因子の研究を行うため、潜伏感染細胞を含めて感染細胞を同定・濃縮可能なレポーター遺伝子を搭載したウイルスの作製を試みている。本年度は同一個体からクローニングしたR5ウイルスとX4ウイルスの感染性クローンを作製し、その感染性とコレセプター利用性を確認した。さらにnef領域に蛍光タンパク質であるvenus遺伝子ないしHSA遺伝子をそれぞれの感染クローンに挿入するとともに、nef遺伝子の発現を確保するために、その上流にIRES遺伝子を組み込み、フローサイトメトリーで検出可能な感染系を樹立した。具体的には末梢血リンパ球にそれぞれのレポーターウイルスを感染させ、細胞表面に発現するHSAタンパク質は蛍光標識のモノクローナル抗体で染色し、venusタンパク質とともにフローサイトメトリーを用いてそれぞれの感染T細胞を検出することができた。さらにメモリーないしナイーブ細胞サブセットへの感染性の違いについても解析が可能となった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
CD4陽性リンパ球へのレポーターウイルスの感染性が非常に低いことが明らかとなり、現在その原因を明らかにしているところである。そのため動物実験の準備ができていない状態である。
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| Strategy for Future Research Activity |
CD4陽性リンパ球への感染性が確保できれば、それぞれのウイルスが感染している細胞のT細胞サブセットの形質を明らかにする予定である。また、それぞれの潜伏感染細胞を検出できるシステムを開発していく予定である。
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| Causes of Carryover |
作製したレポーターウイルスの感染性が低く、末梢血CD4陽性リンパ球への感染確認に時間を要しており、当初計画していた動物を使用した実験系への移行準備のための予算を消化できていない。
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[Journal Article] Control of HIV-1 Replication by CD8+ T Cells Specific for Two Novel Pol Protective Epitopes in HIV-1 Subtype A/E Infection.2022
Author(s)
Nguyen HT, Kuse N, Zhang Y, Murakoshi H, Maeda Y, Tamura Y, Maruyama R, Tran GV, Nguyen TV, Nguyen KV, Oka S, Chikata T, Takiguchi M.
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Journal Title
Journal of Virology
Volume: 96
Pages: e00811-22
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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