低分子化合物によるリプログラミング技術を用いた自己非β膵細胞からの新規β細胞誘導

2023 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 22K08717
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 足立 智彦 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 准教授 (60437879)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 吉野 恭平 長崎大学, 病院(医学系), 医員 (20909204) ; 今村 一歩 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (60909183)
• Project Period (FY): 2022-04-01 – 2025-03-31
• Keywords: 低分子化合物 / 膵外分泌細胞 / 膵前駆細胞

Outline of Annual Research Achievements

マウス膵臓を用いて膵臓を消化酵素処理使用し、膵島細胞を分離する過程で逆に非膵島細胞のみを抽出、低分子化合物（YAC）を用いて前駆細胞化を図っている。① 少分子化合物の検討: YACに加えて、他の化合物も追加して検討。② 培養条件の検討 浮遊培養→接着培養に変えて検討。かつ培養日数の変更も施行。③ 評価方法の検討　PCR解析に加えて、蛍光染色評価を施行。培養日数も再検討施行。
以前と同じ培養条件で、DAY7まで浮遊培養を行い、かつYACに加えて、HDAC-iを加えて、計4つの少分子化合物を組み合わせて検討を行った。コントロール群を含めた6群（YAC/HAC/HYC/HYA/HYAC）で前駆細胞のマーカーであるPDX1、NGN3の発現を評価したが、コントロール群と比較して大きな増加を認めた群は無し。浮遊培養から接着培養に変更するにあたって、メイン培地をRPMI1640からWaymouth’sという特殊な培地に変更、また、培養ディッシュを１型コラーゲンコートディッシュに変更するも変化なし。
STEP１では、acinar cellからduct cellへのトランスディフェレンシエーションを評価。DAY0からDAT7にかけて、Ctrcは減少/KRT19は増加した。一方ステップ２(D8-14)では、duct cellからprogenitor cellへのトランスディフェレンシエーションを評価。
KRT19はDAY7からDAY14にかけて減少し、NGN3はわずかに増加傾向、PDX1はほとんど変化せず。同様の操作を繰り返し、再度評価を行おうと試みましたが、DAY7以降細胞が徐々に死んていくため、DAY14までの培養、評価は難しいと判断し、培養条件を短縮して再評価を行う
上記にて、これまでのところ、CTRC/ KRT19/ PDX1/ NGN3を用いたRT-PCR解析にて、前駆細胞マーカーを検討しているが、培養細胞自体を含めまだ特に腺房細胞からの前駆化を得られていない。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

前駆細胞化に至れていない。

Strategy for Future Research Activity

YACのみならず、肝細胞で前駆細胞を得られる低分子化合物（HAC/FAC)等も使って試みる

Causes of Carryover

実験がうまくいかないことで次のフェーズに進めていないが、増員をして検討する予定である。使用計画としては、実験継続するため小分子化合物/マウス等の消耗品購入が主となる予定である。