生体内系譜追跡による脂肪由来幹細胞の機能解析に基づく新規再生医療の開発

2023 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 22K09864
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 須永 中 自治医科大学, 医学部, 講師 (00406117)
• Project Period (FY): 2022-04-01 – 2025-03-31
• Keywords: 脂肪幹細胞

Outline of Annual Research Achievements

Prx1発現細胞特異的にCre recombinaseを発現するPrx1Creマウスと、Cre recombinaseを発現した細胞において赤色蛍光色素Ai14を発現するRosa26-LSL- tdTomatoマウス(Ai14マウス)、I型コラーゲン発現細胞がEGFPを発現するCol1/EGFPマウスを交配することにより、Prx1発現細胞に由来する細胞がtdTomatoを恒久 的に発現し、なおかつI型コラーゲン発現細胞がEGFPを発現するPrx1Cre;Ai14;Col1/EGFPマウス(PAGマウス)を作製した。PAGマウスの鼠径脂肪より脂肪由来幹細 胞(tdTomato陽性ADSCs)を抽出・培養し、温度反応性ディッシュを用いて脂肪由来幹細胞シート(tdT-ADSCシート)を作製した。続いて、マウスの腱損傷モデルの確立を試みた。試行錯誤の後、ルーペ下に11番メスでアキレス腱の3分の1の幅で横切開を入れる方法だと、経過観察中に腱断裂を起こす可能性が低いことがわかった。この方法で1,2,4週間後に組織を観察したところ、4週で1型コラーゲンによる腱の再生を確認することができた。確立した腱損傷モデルに対してtdT-ADSCシートを移植した。移植後の組織を移植 1,4週間後に蛍光免疫染色にて観察したところ、1週後の組織にはtdTomato陽性GFP陽性の細胞を認め、移植したtdTomato陽性ADSCsが腱の創傷治癒過程におけるコラーゲン生成に寄与していることが示された。しかし、4週後の組織ではtdTomato陽性GFP陽性の細胞は減少しており、移植細胞は腱線維芽細胞には分化していない可能性が示唆された。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

コロナ禍による研究活動制限のため、遺伝子改変マウスの繁殖を維持のみを目的とする匹数まで減らした後に、系統を復活させるのに難渋したため。また、12月に実験データを入れていたパソコンがクラッシュし、バックアップを取っていなかった半年以上のデータが消失したため。

Strategy for Future Research Activity

皮膚欠損モデルと腱損傷モデルに絞って、研究を続ける。

Causes of Carryover

コロナ禍による研究活動制限のため、遺伝子改変マウスの繁殖を維持のみを目的とする匹数まで減らした後に、系統を復活させるのに難渋したため。今年度は当初の計画に従って研究を行い、研究費を使用予定である。