ヒト脂肪幹細胞の陰圧負荷培養を応用した創傷治癒・血管新生効果の解明と応用

2022 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 22K09898
• Research Institution: Kansai Medical University
• Principal Investigator: 覚道 奈津子 関西医科大学, 医学部, 教授 (00509490)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 日原 正勝 関西医科大学, 医学部, 講師 (00351536) ; 光井 俊人 関西医科大学, 医学部, 講師 (40449830)
• Project Period (FY): 2022-04-01 – 2026-03-31
• Keywords: 陰圧 / HUVEC / 創傷治癒

Outline of Annual Research Achievements

陰圧閉鎖療法は創傷治癒に有効であることが知られているが、陰圧が組織修復を調節するメカニズムは不明なままである。肉芽組織を形成するためには、血管新生が必須であり、そのためには血管内皮細胞の増殖・遊走が不可欠である。陰圧下での血管新生促進は、創傷治癒を促進する重要なメカニズムであり、NPWT治療の特徴である肉芽組織の形成に重要なパラメータであると思われる。本年度はまず、陰圧によるHUVECの増殖への影響を調べた。
プレートに播種したHUVECを密閉容器に入れ、蓋をしっかりと閉めてから、臨床でNPWTに使用されているRENASYS TOUCH (Smith & Nephew Co., Watford, UK) を接続した。密閉容器を37℃の5％CO2インキュベーターに入れた。圧設定を-120mmHgとし、連続的に陰圧をかけた状態で培養した。
気圧下で培養した対照群と、陰圧下で培養した細胞の増殖を、CCK-8assayを用いて比較した。その結果HUVECの増殖は、大気圧群と比較して陰圧群で1.2倍に増加した（p < 0.05）。さらに、陰圧下で培養したHUVECのDNA合成をBrdU assayで調べたところ、陰圧処理した細胞のDNAへのBrdUの取り込みはコントロールよりも多かった（p < 0.05）。これらの結果は、陰圧によるDNA合成の増加は、HUVECの増殖と同程度であることを示していた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

細胞培養における適切な陰圧値の設定が可能となり、細胞増殖が確認できたため

Strategy for Future Research Activity

来年度はRNA配列による遺伝子発現の解析を行っていく予定である。

Causes of Carryover

実験が予定より進まなかったため、次年度使用額が生じた。来年度は個別のRT-PCR実験を行う予定。