2022 Fiscal Year Research-status Report
歯周病におけるFPR2シグナルを介した炎症収束機構の解明
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22K09964
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
森本 千晶 大阪大学, 歯学部附属病院, 医員 (70806801)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤原 千春 大阪大学, 大学院歯学研究科, 助教 (00755358)
竹立 匡秀 大阪大学, 歯学部附属病院, 講師 (60452447)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | FPR2 / 歯周病 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究課題では、歯周病の病態形成におけるFPR2の機能を明らかにすることを目的に研究を実施している。すなわち、マウス歯周病モデルの病態形成・組織修復過程における内因性 FPR2シグナルの役割や歯周組織構成細胞あるいは歯周組織に浸潤した免疫細胞の抗炎症作用、エフェロサイトーシス、組織修復作用に対するFPR2の役割について、詳細を明らかにすることを目的に研究を実施している。そこで、絹糸結紮マウス歯周病モデル（以下、マウス歯周病モデル）を用いて歯周病局所におけるFPR2および内因性リガンドの発現解析を実施した。結紮7日目の歯周組織におけるFPR2およびFPR2内因性リガンドであるANXA1の遺伝子発現をin situ hybridization、タンパク発現を免疫染色法にて解析した。その結果、非結紮側に比べ、結紮側にて、結合組織や歯冠側、根尖周囲歯根膜において、FPR2およびANXA1両分子の遺伝子発現の上昇、タンパク発現上昇が認められた。次に炎症性サイトカインがヒト歯根膜細胞（以下、HPDL）からのANXA1産生に及ぼす影響について、in vitroにて検討した。またHPDLを炎症性サイトカインであるIL-1β、TNF-α、IFN-γの存在下で培養し、培養上清中のANXA1濃度をELISA法にて解析した。その結果、IL-1β、TNF-α、IFN-γのいずれの刺激においても培養上清中のANXA1濃度は有意に上昇した。特にIL-1β刺激によりANXA1濃度の顕著な上昇を認めた。以上の結果からANXA1-FPR2シグナルが歯周病の病態形成過程で重要な役割を担う可能性が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
令和4年度には、マウス歯周病モデルにおいて、結紮7日目の歯周組織で、非結紮側に比べ、結紮側にて、結合組織や歯冠側、根尖周囲歯根膜において、FPR2およびFPR2内因性リガンドであるANXA1両分子の遺伝子発現の上昇、タンパク発現上昇が認められ、さらに、HPDLにおいて、IL-1β、TNF-α、IFN-γのいずれの刺激においても培養上清中のANXA1濃度は有意に上昇することが明らかになった。これは、歯周病の病態形成におけるFPR2の機能の一部分について解明したものであり、研究はおおむね順調に進展していると考える。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後の研究課題では、歯周病の病態形成過程におけるFPR2の機能解析を実施する予定である。マウス歯周病モデルに対し、FPR2阻害剤であるWRW4を連日皮下投与することが歯周病の病態形成に与える影響について解析を行う。すなわち、マイクロCT解析にて歯槽骨の吸収量を定量的に解析し、予備実験で得られた結果の再現性を検証するとともに、組織学的解析から歯周組織に浸潤した各種炎症細胞を同定する。一方で、薄切切片のTRAP染色によって破骨細胞を、Tunnel染色によりアポトーシス細胞をそれぞれ検出し、歯槽骨吸収と細胞死に対するFPR2阻害の影響について解析を行う。
さらに、歯周組織構成細胞の炎症反応に対するFPR2シグナルの機能解析についても実施する予定である。HPDLの炎症性サイトカイン産生に及ぼすFPR2シグナルの影響についてin vitroにて解析する。すなわち、FPR2発現を抑制した細胞（siRNAにて導入予定）およびFPR2を強発現させた細胞（レンチウイルスにて導入予定）を作製し、IL-1β、LPSもしくは TNFα刺激した際の、炎症性サイトカインの発現をリアルタイムPCR法、ELISA法にて解析する。さらに結果として、発現に有意な差が認められた場合、メカニズムの解明としてIRAK1およびTRAF6のタンパク発現の検討を加える。なお、内因性リガンドの効果が十分に確認できない場合には、外因性リガンドを添加することでFPR2シグナルを増強させることで解決を試みる。
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| Causes of Carryover |
今年度の学会が近場の開催もしくはオンラインでの開催だったため、予定していた旅費よりもかからずに済んだため。また実験計画通り概ね順調に進行しているため、予備実験等に使用する消耗品を削減できたため。次年度は、初めの予定より多く抗体等の試薬を用いた研究をする必要性が高くなったため、必要な試薬購入に使用する予定である。
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Research Products
(4 results)
