カイメンにおけるメンブレンベシクルを介した物質輸送の解明

2022 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 22K14811
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 二宮 章洋 東京大学, 大学院農学生命科学研究科(農学部), 助教 (50823522)
• Project Period (FY): 2022-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: カイメン / メンブレンベシクル

Outline of Annual Research Achievements

八丈島沖でカイメンTheonella swinhoeiを採取した。当該カイメンには内部が黄色いものと白いものがあり、以下それぞれ「TSY」「TSW」と呼ぶ。カイメンを破砕し、破砕液を濾過した。多段階の遠心分離による分画によって、メンブレンべシクルを含む画分を得た。条件検討の結果、緩衝液として塩化ナトリウムを含むHEPES、密度勾配の媒体としてOptiPrepを用いた密度勾配遠心分離によって、脂質を含む画分がバンドとして得られることがわかった。TSYにおいては、密度勾配遠心分離の結果、3つのバンドが生じた。ネガティブ染色法によってこれらの画分を観察したところ、上2つの画分には約200 um程度の小胞様構造物が見られた。一方、TSWにおいては、密度勾配遠心分離の結果、1つのバンドが生じた。ネガティブ染色法によって観察したところ、TSYで見られたものより小さい、数十um程度の小胞様構造物が見られた。さらに、各画分を有機溶媒で抽出してLCMSによって分析したところ、小胞様構造物を含む画分に、セオネラミド、オンナミド、およびミサキノリドが含まれることが明らかになった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

メンブレンベシクルを含む画分に、カイメンの二次代謝産物が含まれることを示す結果を得たため。

Strategy for Future Research Activity

密度勾配遠心によって得られたメンブレンベシクル画分からRNAとタンパク質を抽出し、それぞれRNA-シーケンシング解析とプロテオーム解析に供する。これによって、メンブレンベシクルに、化合物の産生・輸送に関わる、どのような転写産物・タンパク質が内容されているかを明らかにする。さらに、イメージング質量分析によって、カイメン内での化合物の局在を調べる。