2022 Fiscal Year Research-status Report

Hypoxic micro-environment and therapeutic advances for NF2 schwannomas

Research Project

Project/Area Number	22K15531
Research Institution	Keio University
Principal Investigator	田村亮太慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 助教 (60649961)
Project Period (FY)	2022-04-01 – 2025-03-31
Keywords	NF2 / 神経鞘腫 / 低酸素 / 微小環境
Outline of Annual Research Achievements	神経線維腫症2型（NF2）は、merlin遺伝子変異に基づく多発神経鞘腫を主徴とする稀少難治性遺伝疾患であり、根本的治療法は未だ存在しない。我々は、予備実験でNF2の神経鞘腫内に低酸素環境が存在し、腫瘍の増大と関与する知見を得ており、未だ報告がない新規所見である。そこで本研究課題では、難治性NF2における低酸素や腫瘍免疫微小環境を基盤とした新たな病態を、貴重な臨床検体や動物モデルを用いて構築し、低酸素や腫瘍免疫微小環境を統合的に標的とする新たな治療戦略を提言する。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason まず、NF2関連神経鞘腫及び孤発性神経鞘腫のヒト検体を3例、15例得ることに成功し、HIF-1α,VEGF-A, VEGFR1, VEGFR2を中心に遺伝子発現を解析した。コントロールにこれらの経路が高発現していることで知られている膠芽腫症例を使用した。その結果、両神経鞘腫瘍はGrade 3程度のhigh grade gliomaに相当する高発現を示した。さらに過去のNF2関連神経鞘腫検体22例、孤発性神経鞘腫症例21例の過去の組織検体を用いてタンパクレベルでもそれぞれの高発現を示した。 NF2関連神経鞘腫及び、孤発性神経鞘腫の初代継代は良性腫瘍故に悪性腫瘍ほどの成功率は示さず、やや苦戦したが最終的に、それぞれ2例、3例の大変貴重な細胞株の樹立に成功した。それらの細胞株に関しても、HIF-1α,VEGF-A, VEGFR1, VEGFR2の高発現を遺伝子発現レベルで評価した。現在、低酸素環境における造腫瘍能評価を行い、HIF-1αの発現抑制及び強制発現の準備を行っている。また、神経鞘腫はヒトでは前庭神経に生じることが多く聴力障害が生じることが非常に重要な特徴であるが、聴力障害を安定して生じるモデルの樹立報告は少ない。私達は定位移植装置を用いて、マウスの小脳橋角部に移植する技法を編み出し、聴力障害を来すin vivoモデルを樹立することに成功しつつある。
Strategy for Future Research Activity	低酸素環境下でのNF2関連神経鞘腫及び、孤発性神経鞘腫の造腫瘍能評価を引き続き行い、低酸素環境が神経鞘腫に及ぼす影響を明らかにする。その後、HIF-1αの発現抑制及び強制発現を行い、in vivo モデルで腫瘍増大の差異を評価する。さらに、HIF-1α/VEGF-A・VEGFRsシグナル下流の腫瘍免疫微小環境の解析をまずは、組織学的に行い、NF2関連神経鞘腫及び、孤発性神経鞘腫における腫瘍免疫微小環境の意義を明らかにする。その後、マウスNF2自然発生腫瘍モデル P0-SchΔ(39‐121) line 27を用いて、上述したHIF-1α/VEGFR1・2シグナル及びTreg、TAM、MDSC等の主要な免疫抑制性細胞の発現を解析し再現性をみる。
Causes of Carryover	（理由）効果的に物品調達を行った結果であり、次年度の研究費と合わせて試薬・消耗品などの購入に充てる予定である。（使用計画）次年度も、細胞培養、及び動物実験を行っていく、その上でまず動物購入・飼育費に費用がかかる。本治療計画はヒト細胞を用い、BALB/C由来のNude mouseで実験を行う必要がある。以上含め、その他、培養関連試薬、組織解析の関連試薬を中心に購入予定である。