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2023 Fiscal Year Annual Research Report

トロンボモジュリン結合障害型異常プロトロンビンによる血栓形成機構の分子学的解析

Research Project

Project/Area Number 22K15663
Research InstitutionKanazawa University

Principal Investigator

長屋 聡美  金沢大学, 保健学系, 助教 (00882309)

Project Period (FY) 2022-04-01 – 2024-03-31
Keywords異常トロンビン / アンチトロンビン抵抗性 / トロンボモジュリン抵抗性 / 血栓形成
Outline of Annual Research Achievements

前年度までに、野生型 (WT)に加え、アンチトロンビンとの結合障害 (ATR)またはトロンボモジュリンとの結合障害 (TMR)を示すと予測された変異型プロトロンビン (M380T、R431H)および、ATRを呈することが報告されているR596Lを高純度に精製することに成功しており、その精製プロトロンビンを使用して以下の解析を行った。
【ATRの解析】1) AT添加残存トロンビン活性測定では、R596LでATRを検出できる系を構築した。R431HはATRを認めなかったが、M380TはATRを有している可能性が示された。2) ウエスタンブロットによるトロンビン-アンチトロンビン複合体 (TAT)形成能評価では、WTとR431Hは同等のTAT形成率を示したが、M380TおよびR596Lでは有意にTAT形成率が低下していた。3) 表面プラズモン共鳴法によるATとの親和性解析において算出された解離定数 (KD, ×10^-7 M)は、WT: 0.61に対しR431H: 0.79と同等であったが、M380T: 2.66およびR596L: 0.67はKDが有意に高く、ATとの結合親和性低下が示された。
【活性化プロテインC (APC)生成能解析】TM存在下における異常トロンビンによるAPC生成能を評価した。反応開始後30分後のAPC生成量 (nM/nM thrombin)は、WT: 18.2に対し、M380T: 0.67、R431H: 3.34と著明に減少しPC活性化障害を有することが示された。R596Lは6.11と中程度の減少が確認された。
【TMRの解析】n= 1のため有意差検定はできていないが、算出したKDはWTとR596Lで同等であった。一方で、M380TおよびR431HはKDを算出できない程にレスポンスが低く、ほとんどTMと結合しない可能性が示唆された。

  • Research Products

    (14 results)

All 2024 2023

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results) Presentation (11 results)

  • [Journal Article] Identification of two de novo variants causing inherited antithrombin deficiency by quantitative analysis of variant alleles2024

    • Author(s)
      Nagaya Satomi, Togashi Tomoki, Meguro-Horike Makiko, Matsumoto Haruto, Imai Yuta, Yamaguchi Koichi, Fujii Yoshinari, Moriya Haruka, Kikuchi Yuika, Yasuda Ibuki, Horike Shin-ichi, Morishita Eriko
    • Journal Title

      Thrombosis Research

      Volume: 233 Pages: 37~40

    • DOI

      10.1016/j.thromres.2023.11.016

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Protein S deficiency caused by cryptic splicing due to the novel intron variant c.346+5G>C in PROS12023

    • Author(s)
      Nagaya Satomi, Togashi Tomoki, Akiyama Masaharu, Imai Yuta, Matsumoto Haruto, Moriya Haruka, Meguro-Horike Makik, Yasuda Ibuki, Kikuchi Yuika, Kuwajima Yamato, Horike Shin-ichi, Watanabe Atsushi, Morishita Eriko
    • Journal Title

      Thrombosis Research

      Volume: 229 Pages: 26~30

    • DOI

      10.1016/j.thromres.2023.06.020

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Functional analysis of two abnormal antithrombin proteins with different intracellular kinetics2023

    • Author(s)
      Imai Yuta, Nagaya Satomi, Araiso Yuhei, Meguro-Horike Makiko, Togashi Tomoki, Horike Shin-ichi, Kawasaki Hiroshi, Morishita Eriko
    • Journal Title

      Thrombosis Research

      Volume: 230 Pages: 18~26

    • DOI

      10.1016/j.thromres.2023.08.010

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] コンピューター解析によって解明された血栓形成傾向に重要なプロテインC構造特性2023

    • Author(s)
      安田 芽生, Lopes Tiago J.S., Ferreira Marcos V., Alencar Brenno M., Rios Ricardo A., Rios Tatiane N., 長屋 聡美, 森下 英理子
    • Organizer
      第85回日本血液学会学術集会
  • [Presentation] 細菌感染症に伴うDICにおけるPS切断による抗凝固能低下の可能性2023

    • Author(s)
      長屋 聡美, 山口 孝一, 松井 杏沙佳, 津田 友秀, 森下 英理子
    • Organizer
      第24回日本検査血液学会学術集会
  • [Presentation] 遺伝性アンチトロンビン欠乏症2症例に同定された新規遺伝子バリアント2023

    • Author(s)
      松本 陽斗, 長屋 聡美, 目黒 牧子, 今井 湧太, 竹川 清太郎, 築田 怜奈, 西野 優那, 冨樫 朋貴, 大森 健聖, 牧田 友香, 森屋 羽瑠雅, 奥野 隆祐, 堀家 慎一, 森下 英理子
    • Organizer
      第45回日本血栓止血学会学術集会
  • [Presentation] 新規に同定されたI型遺伝性アンチトロンビン欠乏症p.Cys32Trpの細胞内動態解析2023

    • Author(s)
      菊池 結香, 牧田 友香, 長屋 聡美, 今井 湧太, 冨樫 朋貴, 大森 健聖, 安田 芽生, 松本 陽斗, 森屋 羽瑠雅, 目黒 牧子, 堀家 慎一, 森下 英理子
    • Organizer
      第45回日本血栓止血学会学術集会
  • [Presentation] プロテインC遺伝子における新規バリアントp.Leu173Proおよびp.Val241Leuの細胞内動態の解析2023

    • Author(s)
      安田 芽生, 長屋 聡美, 大森 健聖, 冨樫 朋貴, 今井 湧太, 森屋 羽瑠雅, 菊池 結香, 牧田 友香, 松本 陽斗, 目黒 牧子, 三浦 晃子, 堀家 慎一, 森下 英理子
    • Organizer
      第45回日本血栓止血学会学術集会
  • [Presentation] 出血傾向を呈する異常プロトロンビンSegoviaの機能解析2023

    • Author(s)
      桑島 大和, 長屋 聡美, 大森 健聖, 今井 湧太, 冨樫 朋貴, 牧田 友香, 松本 陽斗, 森屋 羽瑠雅, 安田 芽生, 菊池 結香, 神窪 勇一, 森下 英理子
    • Organizer
      第45回日本血栓止血学会学術集会
  • [Presentation] Prothrombin Himiのアンチトロンビン抵抗性および活性化プロテインC経路障害の解明2023

    • Author(s)
      竹川清太郎,長屋聡美, 桑島大和, 今井湧太, 松本陽斗, 森屋羽瑠雅, 菊池結香, 安田芽生, 築田怜奈, 西野優那, 油井陸斗, 高村禅, 森下英理子
    • Organizer
      第47回北陸臨床病理集談会
  • [Presentation] 出血傾向を呈する異常プロトロンビンSegoviaの機能解析2023

    • Author(s)
      桑島大和, 長屋聡美, 今井湧太, 松本陽斗, 森屋羽瑠雅, 菊池結香, 安田芽生, 竹川清太郎, 築田怜奈, 西野優那, 油井陸斗, 神窪勇一, 森下英理子
    • Organizer
      第47回北陸臨床病理集談会
  • [Presentation] 先天性アンチトロンビン欠乏症患者に同定された新規バリアントp. Tyr395Asnの分子病態解析2023

    • Author(s)
      築田怜奈, 長屋聡美, 松本陽斗, 今井湧太, 菊池結香, 安田芽生, 森屋羽瑠雅, 桑島大和, 竹川清太郎, 西野優那, 油井陸斗, 目黒牧子, 堀家慎一, 荒磯裕平, 森下英理子
    • Organizer
      第47回北陸臨床病理集談会
  • [Presentation] 遺伝性プロテインC欠乏症患者に同定された新規バリアントc.302G>T , p.Cys101Pheの症例報告2023

    • Author(s)
      油井陸斗, 安田芽生, 長屋聡美, 今井湧太, 松本陽斗, 菊池結香, 森屋羽瑠雅, 桑島大和, 竹川清太郎, 築田怜奈, 西野優那, 目黒牧子, 堀家慎一, 森下英理子
    • Organizer
      第47回北陸臨床病理集談会
  • [Presentation] 新規バリアントp.Cys64*を有する遺伝性プロテインC欠乏症の一例2023

    • Author(s)
      安田芽生, 油井陸斗, 長屋聡美, 今井湧太, 松本陽斗, 菊池結香, 森屋羽瑠雅, 桑島大和, 竹川清太郎, 築田怜奈, 西野優那, 目黒牧子, 堀家慎一, 森下英理子
    • Organizer
      第47回北陸臨床病理集談会

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Published: 2024-12-25  

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