2023 Fiscal Year Research-status Report
D2R-mediated Gs/Gi rebalancing in ALS motor neurons
| Project/Area Number |
22K15736
|
|---|
| Research Institution | Keio University |
|---|
Principal Investigator |
森本 悟 慶應義塾大学, 殿町先端研究教育連携スクエア, 特任准教授 (00816952)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2027-03-31
|
| Keywords | ALS / 運動ニューロン / ドパミンD2受容体 / Gタンパク質 / アデノシンA2A受容体 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
今年度の研究実施計画：健常者およびALS患者由来脊髄運動ニューロンにおけるGs/Giバランスとリン酸化カスケード：健常者ならびにALS患者由来脊髄運動ニューロンの定常状態において、イムノブロットおよび各種リン酸化モチーフ抗体を用いて、リン酸化シグナル伝達活性の評価を行う。
今年度の研究実績：健常者iPS細胞にALS/FTD患者（FTD：前頭側頭型認知症）にみられるTARDBP遺伝子変異（TARDBP：TDP-43タンパク質をコードする遺伝子）をヘテロ接合体およびホモ接合体で導入したisogenic株について、脊髄運動ニューロンに分化させた。その後、イムノブロットおよび各種リン酸化モチーフ抗体を用いて、リン酸化シグナル伝達活性を評価したところ、主要なキナーゼを検出することに成功した。また、TARDBP遺伝子変異の有無では、明らかなキナーゼの発現量に差はみられなかった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究課題の第２ステップである、”健常者ならびにALS患者由来脊髄運動ニューロンの定常状態において、イムノブロットおよび各種リン酸化モチーフ抗体を用いて、リン酸化シグナル伝達活性の評価を行う”ことができ、誘導系・評価系のfeasibilityを確認できたため。
|
| Strategy for Future Research Activity |
次年度は、今年度までで確立した”運動ニューロンの誘導系”および”リン酸化シグナル伝達活性の評価系”を用いて、D2RおよびA2AR刺激による運動ニューロンへの影響を調べる。具体的には、作製したヒト運動ニューロンに、受容体の発現が確認できているropinirole hydrochlorideなどのD2R agonist、あるいはCGS21680 hydrochlorideなどのA2AR agonistを用いて受容体-Gs/Gi刺激を行うことで、PKAのリン酸化標的であるGluR1（Roche KW, et al. Neuron 1996）のリン酸化状態を指標として、各agonistによるリン酸化シグナル修飾効果を確認する。
|
| Causes of Carryover |
iPS細胞の培養維持・分化誘導に関わる消耗品費用が、今年度は想定より少なくなったため、次年度の同項目消耗品購入計画に繰り入れる。
|
