2023 Fiscal Year Research-status Report
クローン病の腸管線維化と粘膜低酸素領域との関連性の免疫学的解明
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22K16015
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
村手 健太郎 名古屋大学, 医学部附属病院, 病院助教 (50936549)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | クローン病 / 腸管線維化 / 粘膜低酸素領域 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
概要）
我々は低酸素領域での免疫細胞の関与に、CD患者の腸管の過度の線維化を起こすプロセスがあるのでは無いかと仮定し実験を計画した。
①On timeで低酸素領域を同定できる内視鏡を用いて経時的なsample採取を行い、網羅的解析を含めた免疫学的解析を施行し関連因子及び関連pathwayを同定する。②独自に開発した小腸線維化モデルマウスをbaseに、特定した因子のコンディションノックアウトマウスを作成しin vivo実験を行い、同定した因子の線維化との関連を解明する。③小腸線維化部位より採取した腸管線維芽細胞を用いたin vitro実験を計画している。
１、異なる経過を取った患者（軽度線維化、過度の線維化）の時系列sampleを（炎症期、線維化期の低酸素領域及び正常領域）を用いて患者間での比較をRNAseqにて網羅的解析を実施し、その中からkeyとなる因子（Factor-X）を同定した。現在Factor-Xによる過度の線維化に寄与するメカニズムを模索している。また今回の網羅的解析において、低酸素部位でdown-regulateするpathwayとして、あるcytokine receptorに関連するpathwayを同定した。我々が以前施行した別のCD患者の線維化部位の（内視鏡的）低酸素領域及び正常領域での免疫細胞解析により、特定の免疫細胞が関連している可能性を考慮していたが、今回の網羅的解析でも同様の結果であった。２、また我々独自に開発した小腸線維化モデルマウスについても同上の免疫細胞及びFactor-Xの関連を確認した。３、また小腸線維化部位より採取した腸管線維芽細胞と特定の免疫細胞およびFactor-Xを共培養することにより、腸管線維芽細胞が過度の線維化を起こすことを確認した。
上記実験の結果より、我々の着目している因子は線維化の差異に関連している可能性が高いと考えている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
進捗状況）
異なる経過を取った患者（炎症→軽度線維化、炎症→過度の線維化）の時系列sampleを（炎症期、線維化期の低酸素領域及び正常領域）を用いて患者間での比較をRNAseqにて網羅的解析を実施した。
ただ、前年度の報告でも言及したが、COVID19の影響で一時sampleの採取が予定よりも大幅に遅れた。
なんとかsampleの採取及び解析が終了し、解析の結果、複数の関連因子を同定し、それら因子のRNAレベル及び蛋白レベルの発現の差を確認した。その中からkeyとなる因子（Factor-X）を同定した。現在Factor-Xによる過度の線維化に寄与するメカニズムを模索している。また今回の網羅的解析において、低酸素部位でdown-regulateするpathwayとして、あるcytokine receptorに関連するpathwayを同定した。（我々は元々ある免疫細胞に着目した解析を計画していたので、我々の予想通りであった。）
我々が以前施行した別のCD患者の線維化部位の（内視鏡的）低酸素領域及び正常領域での免疫細胞解析により、特定の免疫細胞が関連している可能性を考慮していたが、今回の網羅的解析でも同様の結果であった。また我々独自に開発した小腸線維化モデルマウスについても同上の免疫細胞及びFactor-Xの関連を確認した。また小腸線維化部位より採取した腸管線維芽細胞と特定の免疫細胞およびFactor-Xを共培養することにより、腸管線維芽細胞が過度の線維化を起こすことを確認した。上記実験の結果より、我々の着目している因子は線維化の差異に関連している可能性が高いと考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後の展望）
特定の免疫細胞におけるFactor-Xが腸管線維化の本質に関連する可能性を考慮し、CD患者の線維化部位の内視鏡sampleや手術検体を用いて、現在メカニズムの解明の為の追加免疫学的解析を施行している。
現在、独自に作成した小腸線維化マウスにFactor-Xの阻害剤を投与し、効果判定している途中である。
またFactor-Xのコンディションノックアウトマウスの作成を進めて、解析していく予定である。
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| Causes of Carryover |
１、本年度にコンディションKOマウスを作成する予定であったが、因子同定が少し遅れたので、次年度に作成する事。
２、FactorXの阻害剤を用いた実験も、網羅的解析の遅れで遅れてしまっている。
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