2022 Fiscal Year Research-status Report
変形性膝関節症に対する間葉系幹細胞治療の除痛メカニズムの解明
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22K16782
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| Research Institution | Hyogo Medical University |
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Principal Investigator |
井石 智也 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (40774138)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2026-03-31
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| Keywords | 変形性膝関節症 / 関節炎 / 膝関節 / 間葉系幹細胞 / 脊髄後根 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、モノヨード酢酸の膝関節内への注射にて作成した薬剤性膝関節炎モデルラットを使用している。モノヨード酢酸の両膝投与後1週後に、片膝の膝関節内に間葉系幹細胞（Mesenchymal stromal stem cell: MSC）を投与することにより、その除痛効果と軟骨組織の修復作用を検討している。
検討内容は、軟骨下骨に存在する炎症タンパク質calcitonin gene-related peptide (CGRP)やIL-6、TNF-αなどの炎症性サイトカイン、末梢から遊離される神経成長因子(NGF)の遺伝子解析を行い、関節内炎症抑制を評価する計画である。さらに除痛効果や疼痛感作を確認するために、両側の第4腰椎高位後根神経節を採取し還流固定を行い、神経損傷および軸索の再生のマーカーとしてERK、関節由来の発痛物質であるCGRP、軸索再生マーカーであるactivating transcription factor-3 (ATF3) growth associated protein-43 (GAP43)を免疫染色し解析することを目的としている。現在、モノヨード酢酸投与後の1週、2週、3週での疼痛行動試験を行った後、3週目での屠殺にて膝関節とDRGを回収、固定を行なった。現在、膝関節軟骨切片においては上記するマーカーの免疫組織染色を行なっており、DRGに関しては、環流固定後に凍結切片を作成している。治療群に使用するMSCに関しては、第2継代の異なる2部位から回収した骨髄由来MSCを作成、分化能や増殖能の確認試験を行ったのち、保存している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
回収したDRGの環流固定方法での検討を要したため、実験計画がやや遅れる結果となった。環流装置使用の有無について検討の結果、凍結切片まで安定した作成が可能となった。また、使用するMSCの多分化能、増殖能、抗炎症能の確認に検討を要したが、こちらも安定した細胞の使用が可能となった。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、MSC治療群の関節注射を予定しており、合わせてこれらの群の疼痛行動試験、DRGでの軸索再生反応の解析を予定している。
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| Causes of Carryover |
コロナウイルス感染症の拡大により、学会の不参加やオンライン参加へ変更となったため、予定計上していた経費について次年度使用額が生じた。次年度の遺伝子解析の費用に計上する予定である。
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