卵巣明細胞癌に対するCarbonyl reductase 1遺伝子治療の有効性

2022 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 22K16848
• Research Institution: Hirosaki University
• Principal Investigator: 大澤 有姫 弘前大学, 医学研究科, 客員研究員 (30613484)
• Project Period (FY): 2022-04-01 – 2025-03-31
• Keywords: 卵巣癌 / 遺伝子治療 / 子宮頸癌 / ヒトパピローマウイルス / ddPCR

Outline of Annual Research Achievements

子宮頸癌患者における血漿中のヒトパピローマウイルス(HPV)を定量化し、予後予測マーカーとしての有用性の検討をしている。血漿中の血液遊離遺伝子(cell-free DNA; cfDNA)が近年、癌の早期発見や治療効果予測に有用なバイオマーカーとして注目されている。また子宮頸癌はほとんどがHPVの持続感染が原因とされている。子宮頸癌のリスクとなるHPVはHPV16・18型が最も多い。HPVは8000塩基の二本鎖環状DNAウイルスであり、発癌機序にはE6、E7領域の遺伝子発現がある。HPVのE7領域をターゲットとしてdroplet digital PCR(ddPCR)にて高感度でHPV-cfDNAが検出されることから有用なバイオマーカーになりうるのではないかと考えられた。
研究目的としては、実際の患者検体より治療前、治療後3ヵ月毎に血液を採取し、従来行われている腫瘍マーカーや画像検査と比較してcfDNAが新たなモニタリングとなるかを検討することである。
本研究の基礎実験として、血漿サンプルに作成したHPV16・18型のE7領域の人工プラスミドを入れて、cfDNAを精製した。Bio-radで作成したプライマー・プローブを使用し、ddPCRで検出されるか検討を行ったところ、高感度に検出されることを確認した。
次に、弘前大学大学院医学研究科倫理委員会で承認を得て(承認番号：2022-126) 、子宮頸癌および子宮頸癌の前癌病変である子宮頸部異形成の患者より治療前、治療後の血液検体を収集している。子宮頸癌症例は30例、子宮頸部異形成症例は20例を目標としていて、現時点で目標症例数の半数以上の同意が得られている。今後は実際の患者検体をddPCRで定量化し、解析を行っていく予定である。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

科研費申請後に研究機関から異動になったため、当初申請していた卵巣癌のマウスの研究のように毎日観察するような研究が困難となった。卵巣癌遺伝子治療の研究と同様に急がれる課題として、子宮頸癌早期発見に寄与する研究があったため、現状で実施可能な研究としてそちらを遂行した。

Strategy for Future Research Activity

交付申請時とは研究環境が変化しており、当初予定していた卵巣癌の研究が滞る状態となってしまった。研究計画書に記したマウスを用いた研究は連日の観察等が必要となるため、当該研究機関での研究体制が整い次第、再開を検討している。それに代わる研究として、子宮頸癌の早期発見・治療効果予測マーカーとなりうる、患者血清中ヒトパピローマウイルスの血液遊離遺伝子(cell-free DNA; cfDNA)のバイオマーカーとしての有用性についての研究を先に遂行させていただいた。
患者検体を利用した研究のため弘前大学大学院医学研究科倫理委員会で承認を得て(承認番号：2022-126) 、子宮頸癌および子宮頸癌の前癌病変である子宮頸部異形成の患者より治療前、治療後の血液検体を収集している。子宮頸癌症例は30例、子宮頸部異形成症例は20例を目標としていて、現時点で目標症例数の半数以上の同意が得られている。今後は実際の患者検体をddPCRで定量化し、解析を行っていく予定である。

Causes of Carryover

当初計画していた研究が状況の変化により実施困難となり、現在の状況で遂行可能な研究を進めているため、次年度使用額が生じた。次年度に当初の計画が実施可能となれば、マウスの購入や卵巣癌細胞株の購入等に使用予定である。