2022 Fiscal Year Research-status Report
Can Granularicin Cause Unexplained Infertility? Towards Establishing Miscarriage Prevention Method
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22K16867
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
市川 智子 日本医科大学, 医学部, 助教 (10366726)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2027-03-31
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| Keywords | 流産 / グラニュライシン / ヘパリン / 免疫 / 不育症 / 炎症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1.グラニュライシン(GNLY)による免疫細胞の変化 ：GNLYをwildマウスに投与し、コントロール群と比較したところ、マクロファージをM1に誘導し、TLR4(Toll Like Receptor 4)を活性化した。この事はGNLYが免疫刺激を行っている事を示している。2.ヘパリンは炎症による流産を防止できるか： ヘパリンは不育症の原因である抗リン脂質抗体症候群に対する標準的治療として知られているが、抗凝固作用の他に抗炎症作用が報告されている。原因不明不育症患者さんの一部は免疫異常と考えられているため、ヘパリンがこれらの患者さんに対する治療薬になる可能性がある。また、GNLYは炎症によって分泌される物質であるため、ヘパリンがGNLYによって誘導される流産を回避できる可能性がある。GNLY トランスジェニックマウスが作成されるまで、リポポリサッカライド(LPS)によって惹起される炎症誘導性流産をヘパリンが抑制するか確認するためにマウスを用いた実験で行なっている。ヘパリンは有意差をもって流産を防止することが確認できた(LPS流産率：70.96%, ヘパリン＋LPS流産率：36.58%, P=0.0156 コントロール流産率：6.8%, P<0.0001)これにより、ヘパリンは炎症を抑制することで流産を防止したことが示唆される。3.流産防止のメカニズムの解析： 免疫細胞の動向を評価することでヘパリンによる流産防止メカニズムを評価した。LPSのみとLPSとヘパリンを投与したマウスの子宮筋層と脱落膜の免疫細胞を比較解析した。結果は子宮筋層と脱落膜でヘパリンはマクロファージをM2に誘導し、TLR4も低下させた。また、脱落膜のNKT 細胞(Natural Killer T cell)のCD69を低下させた。この事はヘパリンが免疫寛容に誘導し、炎症を抑制していることを明らかにしている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
マウスを妊娠させてからの研究であるため、マウスが妊娠しない場合は、なかなか研究が進行しない場合もあるが、様々な工夫をして研究を進めている。GNLYはマウスに存在しないため、現在GNLY遺伝子導入されたGNLYトランスジェニックマウスを作成している。国立遺伝学研究所に依頼し、現在作成過程である。このマウスの作成に半年から1年程度時間を要するため、それまでは、wildマウスを用いてLPSで流産を引き起こし、ヘパリンの抗炎症効果について評価し、またその背景で動いている免疫システムの変化について解析していく。将来的にGNLYトランスジェニックマウスを用いてこれまで蓄積してきた同様のメソッドを使うので、有効な研究の進め方とも考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
1.流産防止のメカニズムの解析―細胞内サイトカインの評価： LPSのみとLPSとヘパリンを投与したマウスの子宮筋層と脱落膜の免疫細胞の細胞内サイトカインを比較解析している。IL-1bβ、TNF-α、IGN-γ、IL-4、IL-10、パーフォリン、グランザイムを評価し、ヘパリンがサイトカインも免疫寛容に誘導しているかを評価する。2.GNLYが流産を誘導するか：15kdaリコンビナントGNLYを妊娠したwildマウスに投与したが、流産を誘導することができなかった。その理由としては、マウスにはGNLYが存在しないためか投与量の問題であると考えられる。今後としては15kdaのGNLYが遺伝子導入されたトランスジェニックマウスを作成し、そのマウスにGNLYを投与することで流産を誘導できるかどうか評価する予定である。遺伝子導入専門施設で作成していただくことが決定している。トランスジェニックGNLY妊娠マウスに炎症を惹起するアラーミンである15kdaGNLYを投与し、流産が誘導されるか評価していく。3.GNLYで誘導した流産のメカニズムの解析：15kdaGNLY投与したマウスの子宮筋層と脱落膜の免疫細胞をGLNYトランスジェニックマウスと比較解析し、マクロファージやTLRやNKT細胞の動向を評価する。4.GNLYで誘導した流産のメカニズムの解析―細胞内免疫：GNLYを投与したトランスジェニックマウスの子宮筋層と脱落膜の免疫細胞の細胞内サイトカインを解析し、IL-1bβ、TNF-α、IGN-γ、IL-4、IL-10、パーフォリン、グランザイム、GNLYを評価し、GNLYによって分泌されるサイトカインの動向を評価する。最終的にGNLYが流産における動向を把握し、流産防止するにはどのようにしたらいいかを評価する。
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| Causes of Carryover |
昨年度は、1月ごろ申請を行い、年度内に施行する必要がある、研究費を得る事ができたことや、研究支援員の確保もできたため、次年度使用額が生じてしまった。次年度仕様額は来年度以降の研究支援員の費用として考えておく。
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