口腔扁平上皮癌患者の不良予後に関与するMaspinの分子機構の解明

2023 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 22K17204
• Research Institution: Tottori University
• Principal Investigator: 川崎 誠 鳥取大学, 医学部附属病院, 医員 (80816372)
• Project Period (FY): 2022-04-01 – 2025-03-31
• Keywords: Maspin / subcellular localization / OSCC / prognosis / proliferation ability

Outline of Annual Research Achievements

進行した口腔扁平上皮癌（OSCC）の予後は不良である．Maspin （mammary　serine protease inhibitor）は抑制遺伝子として機能するとされているが，ヒト乳癌や肺癌などでは細胞質のみに発現するMaspin（cytMaspin）は独立した予後不良因子であることが報告されている．研究者らはOSCCにおいてもcytMaspinが独立した予後不良因子であることを報告したが，その詳細な分子機構は不明である．本研究では、1）ヒトOSCC細胞におけるMaspinの細胞内局在に依存した機能解析，2）Maspinの細胞内局在制御機構の解析を行い、OSCCの悪性度に関わるMaspinの役割を明らかにすることを目的としている．本研究の成果はOSCC患者の予後予測や新たな分子標的治療薬を開発する上での基礎的データになることが期待できる．
OSCC細胞13株(KON， OSC20， OSCI9， HO-1-N-1,HO-1-4-1等）について，Western blot法でMaspinの発現を確認し，多くの細胞株でMaspinの発現が確認できた．また発現したタンパク質について細胞質と核に分画し，細胞内局在を確認したところ多くの細胞株で細胞質にMaspinの発現を認めた．またsiRNA，shRNAでMaspinの発現をノックダウンさせ、浸潤能及び増殖能の変化を検討したが，有意な結果が得られなかった．
Phos tagを用いてOSCC細胞株のMaspinのリン酸化を解析したが，リン酸化は確認できなかった．EGFを導入し，再度Phos tagを用いてOSCC細胞株のMaspinのリン酸化を解析したところ，Maspinのリン酸化が確認できた細胞株を認めた．また，EGF導入を行った細胞株で蛍光免染を行ったところ，Maspinの発現量の増加が示唆された細胞株を認めた．

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

Maspinをノックダウンさせた後の細胞株における浸潤能，増殖能に関して有意な結果が出なかったこと，EGF導入をしなかったOSCC株についてリン酸化が確認できなかったこと，shRNAを用いてMaspinのノックダウンを試みたが，Maspinの減少を確認できなかったことなど、仮説通りの結果が得られなかったことによる．

Strategy for Future Research Activity

OSCC細胞株にEGFを導入しWestern Blotを行い，cytMaspinとpanMaspinでMaspinの発現量の増加の有無，核内移行の有無を調べる．
OSCC細胞株にEGFを導入を行い，cytMaspinとpanMaspinでMaspinのリン酸化に違いがあるか調べる．

Causes of Carryover

浸潤能や増殖能の実験において研究計画通りの結果が得られず，研究の進行が遅れており次年度使用が生じることとなった．
次年度はOSCC細胞株にEGF導入を行いcytMapinとpanMaspinでのMaspinの発現量の増加の有無，核内移行の有無を調べる．またMaspinのリン酸化に違いがあるか調べる．