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2022 Fiscal Year Research-status Report

TNF-αによる破骨細胞分化および歯の移動時のエピジェネティクス制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number 22K17223
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

野口 隆弘  東北大学, 大学病院, 助教 (20907430)

Project Period (FY) 2022-04-01 – 2024-03-31
Keywords破骨細胞 / TNF-α / 矯正学的歯の移動 / RANK / エピジェネティクス
Outline of Annual Research Achievements

破骨細胞形成の際にRANKLとTNF-αが相乗的に作用することが報告されている。申請者らの研究でTNF-αを破骨細胞前駆細胞に作用させるとRANKLの受容体であるRANKの発現が増加することが明らかになっている。また、TNF-αは免疫反応で重要な転写因子NF-kBを活性化させることでRANK発現を促進することも見出している。一方、単球をTNF-αで刺激した際に、NF-kBはヒストンメチル化酵素であるSET7/9と結合して核内に移行し、ヒストンH3K4のメチル化を起こすことでヘテロクロマチンからユークロマチンへの移行を促し、炎症に関連する遺伝子の転写の活性化を行っていることが報告されている。本研究では、破骨細胞前駆細胞におけるTNF-αによるRANK発現の増強のメカニズムにSET7/9が及ぼす影響について解明することを目的とする。まず、マウス骨髄細胞から破骨細胞前駆細胞を培養し、タンパクを回収後、SET7/9の抗体を用いてウェスタンブロットを行うことで、破骨細胞前駆細胞中のSET7/9の発現を確認した。次に、破骨細胞前駆細胞のSET7/9をリポフェクション法によりノックダウンし、TNF-α刺激時のRANK発現に及ぼす影響をリアルタイムPCRにより解析した。結果、TNF-αにより増強されたRANK発現が、SET7/9のノックダウンにより減少することが明らかになった。また、近接ライゲーションアッセイによりSET7/9とNF-kBのサブユニットであるp65のタンパク質相互作用が見られた。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

SET7/9とp65が破骨細胞前駆細胞中で複合体を形成していることを確認するための共免疫沈降実験の条件検討に時間を要しているため。

Strategy for Future Research Activity

破骨細胞前駆細胞に対するRANK遺伝子プロモーターのNF-kB結合領域の解明を行う。その後、TNF-α刺激によりNF-kBおよびSET7/9がRANK遺伝子発現領域に動員されるかをChIPアッセイにより解析する。また、NF-kBおよびSET7/9によるRANK遺伝子領域のヒストンメチル化制御の解明をChIPアッセイにより解析する。

Causes of Carryover

今年度購入予定だった試薬が海外発注品のため、予定より発送に時間がかかっていることに伴い、次年度使用額発生した。今後予定している実験の試薬および実験動物の購入費として使用する。

  • Research Products

    (2 results)

All 2023 2022

All Journal Article (2 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 2 results)

  • [Journal Article] Docosahexaenoic acid inhibits TNF-α-induced osteoclast formation and orthodontic tooth movement through GPR1202023

    • Author(s)
      Ma Jinghan、Kitaura Hideki、Ogawa Saika、Ohori Fumitoshi、Noguchi Takahiro、Marahleh Aseel、Nara Yasuhiko、Pramusita Adya、Kinjo Ria、Kanou Kayoko、Kishikawa Akiko、Ichimura Atsuhiko、Mizoguchi Itaru
    • Journal Title

      Frontiers in Immunology

      Volume: 13 Pages: ー

    • DOI

      10.3389/fimmu.2022.929690

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Analysis of Coating Loss from Coated Stainless Steel Orthodontic Wire2022

    • Author(s)
      Ito Arata、Kitaura Hideki、Noguchi Takahiro、Ohori Fumitoshi、Mizoguchi Itaru
    • Journal Title

      Applied Sciences

      Volume: 12 Pages: 9497~9497

    • DOI

      10.3390/app12199497

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2023-12-25  

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