ダイレクトリプログラミングによる脳梗塞モデルマウスの海馬神経細胞と認知機能の再生

2022 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 22K17799
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 福井 裕介 岡山大学, 大学病院, 助教 (60824802)
• Project Period (FY): 2022-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: ダイレクトリプログラミング / 脳梗塞モデルマウス / 神経細胞新生

Outline of Annual Research Achievements

RNA結合タンパク質であるpolypyrimidine tract-binding protein 1（Ptbp1）は、神経細胞特異的スプライシングを抑制し、非神経細胞では高レベルで発現するが、神経細胞ではダウンレギュレーションされることが報告されている。これまでの研究でPtbp1の発現を抑制すると、非神経細胞では多くの神経系細胞特異的遺伝子の発現が確認され、神経系細胞へのリプログラミングが誘導されることが確認されている。本研究では、アストロサイト特異的にPtbp1 mRNAをノックダウン（KD）するアデノ随伴ウイルスベクター(AAV)を尾静脈投与し、脳梗塞後に認知機能低下を呈するマウスにおいてその治療効果を検討する。
8週齢C57BL/6Jマウスに一過性中大脳動脈塞栓術によって脳梗塞を作成し、術後3日目に血液脳関門を通過し脳内感染が可能なカプシドでパッケージングしたAAV-pGFAP-CasRx-SgRNA-(Ptbp1)またはそのコントロールベクターを尾静脈投与した。脳梗塞作成後より神経症状の評価のためにBederson’s test, Rotarod test, Elevated body swing testを週1回行い、 認知機能評価のためにNovel object recognition testを4，8週目に行った。8週間後に灌流固定し、梗塞体積（Nissl染色）及びmCherry陽性成熟神経細胞(NeuN)に群間差が見られるかどうか評価した。
8週目のNovel object recognition testにおいて、Ptbp1KD群では新奇物体に対する接触時間の有意な延長を認め、認知機能の改善が見られた。また、海馬でmCherry/GFAP二重陽性アストロサイト様グリアが、新しいmCherry/NeuN二重陽性ニューロン様細胞へと変化していた。

Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

2022年度内に予定していた実験を終え、論文作成に着手することができたため。

Strategy for Future Research Activity

令和5年度は、まず作成中の論文を投稿する。さらに、Ptbp1ノックダウンにより脳梗塞後の認知機能回復を確認できたためその作用機序の解明および他の認知症モデルマウスにおけるPtbp1ノックダウンの効果を検討する。

Causes of Carryover

本年度はPtbp1ノックダウンにより脳梗塞後の認知機能回復を確認できたため、令和5年度はその作用機序の解明および他の認知症モデルマウスにおけるPtbp1ノックダウンの効果を検討する予定であり、そのためのマウス、抗体、遺伝子解析キットなどの消耗品を購入する予定である。