• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to project page

2023 Fiscal Year Annual Research Report

イヌiPS細胞由来赤血球による新規輸血療法の実現に向けた基盤技術の構築

Research Project

Project/Area Number 22KJ2618
Allocation TypeMulti-year Fund
Research InstitutionOsaka Metropolitan University

Principal Investigator

木村 和人  大阪公立大学, 大学院獣医学研究科, 特別研究員(DC2)

Project Period (FY) 2023-03-08 – 2024-03-31
KeywordsイヌiPS細胞 / 赤血球
Outline of Annual Research Achievements

iPS細胞は、献血ドナーに依存しない赤血球の安定供給源となりうる。本研究では、ゲノム編集により、赤血球マーカーレポーターイヌiPS細胞株の樹立を行うことで、iPS細胞由来赤血球の作製法を検討する上で必要とされる評価系を構築し、イヌiPS細胞を用いた効率的な赤血球作製法を明らかにすることを目的としている。本年度では、以下の成果が得られた。
1.ゲノム編集によるレポーターイヌiPS細胞株の樹立とその特性解析
CRISPR-Cas9システムにより、赤血球マーカーであるGYPA遺伝子座にEGFP遺伝子を挿入したレポーターイヌiPS細胞(GYPA-EGFPイヌiPS細胞)を作製し、抗体なしにイヌiPS細胞由来赤血球の検出および定量化を試みた。ノックイン用プラスミドベクターをイヌiPS細胞へ導入すると、目的の遺伝子座へのノックインに成功したことが示唆される細胞クローンが複数得られ、それらはiPS細胞特性を維持していた。さらに、これらのクローンから、われわれが構築したプロトコールで赤血球へ分化誘導した。その結果、分化細胞は、EGFPの発現が確認され、経時的にフローサイトメトリー解析を行ったところ、EGFP陽性細胞の割合は95%以上まで上昇した。これらのことから、GYPA-EGFPイヌiPS細胞の作製に成功し、イヌiPS細胞由来赤血球系譜細胞を抗体なしで簡便に解析可能となった。
2.イヌiPS細胞の培養条件の検討
イヌiPS細胞から赤血球を作製するうえで、イヌiPS細胞培養条件の効率化は非常に重要である。そこで、ヒト幹細胞用市販培地および足場剤がイヌiPS細胞培養へ応用可能か検討した。その結果、StemFlexまたはmTeSR Plus培地とビトロネクチンまたはGeltrexの足場剤を組み合わせることで、週末の培地交換なしに効率よくイヌiPS細胞を培養可能であることが明らかになった。

  • Research Products

    (7 results)

All 2024 2023

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results,  Open Access: 3 results) Presentation (4 results) (of which Int'l Joint Research: 2 results)

  • [Journal Article] Canine induced pluripotent stem cells can be successfully maintained in weekend-free culture systems2024

    • Author(s)
      KIMURA Kazuto、NAGAKURA Hiroya、TSUKAMOTO Masaya、YOSHIDA Takumi、SUGISAKI Hiroko、SHISHIDA Kohei、TACHI Yuta、SHIMASAKI Shoko、SUGIURA Kikuya、HATOYA Shingo
    • Journal Title

      Journal of Veterinary Medical Science

      Volume: 86 Pages: 247~257

    • DOI

      10.1292/jvms.23-0422

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Generation of canine induced pluripotent stem cells under feeder-free conditions using Sendai virus vector encoding six canine reprogramming factors2024

    • Author(s)
      Tsukamoto Masaya、Kimura Kazuto、Yoshida Takumi、Tanaka Miyuu、Kuwamura Mitsuru、Ayabe Taro、Ishihara Genki、Watanabe Kei、Okada Mika、Iijima Minoru、Nakanishi Mahito、Akutsu Hidenori、Sugiura Kikuya、Hatoya Shingo
    • Journal Title

      Stem Cell Reports

      Volume: 19 Pages: 141~157

    • DOI

      10.1016/j.stemcr.2023.11.010

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Generation, characterization, and differentiation of induced pluripotent stem-like cells in the domestic cat2023

    • Author(s)
      KANEGI Ryoji、HATOYA Shingo、KIMURA Kazuto、YODOE Kyohei、NISHIMURA Toshiya、SUGIURA Kikuya、KAWATE Noritoshi、INABA Toshio
    • Journal Title

      Journal of Reproduction and Development

      Volume: 69 Pages: 317~327

    • DOI

      10.1262/jrd.2022-038

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] イヌiPS細胞のFeeder-freeかつWeekend-free培養システムの検討2024

    • Author(s)
      木村和人、長倉京哉、塚本雅也、杉崎晧子、志々田康平、島崎翔子、舘結太、杉浦喜久弥、鳩谷晋吾
    • Organizer
      第23回日本再生医療学会総会
  • [Presentation] イヌiPS細胞を用いた赤血球系譜への分化誘導2023

    • Author(s)
      木村和人、塚本雅也、田中美有、桑村充、石原玄基、中西真人、杉浦喜久弥、鳩谷晋吾
    • Organizer
      日本獣医再生医療学会 第18回年次大会
  • [Presentation] Red blood cell differentiation from multiple cell types-derived canine induced pluripotent stem cells.2023

    • Author(s)
      Kazuto Kimura, Masaya Tsukamoto, Miyuu Tanaka, Mitsuru Kuwamura, Genki Ishihara, Mahito Nakanishi, Kikuya Sugiura, Shingo Hatoya.
    • Organizer
      2023 North American Veterinary Regenerative Medicine Association (NAVRMA) Conference
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Developing canine induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes for dilated cardiomyopathy disease modeling in Doberman pinschers.2023

    • Author(s)
      Kazuto Kimura, Maria Questa, Joshua Stern, Shingo Hatoya, Amir Kol.
    • Organizer
      2023 North American Veterinary Regenerative Medicine Association (NAVRMA) Conference
    • Int'l Joint Research

URL: 

Published: 2024-12-25  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi