コクサッキーウイルスＢ群３型を用いた悪性腫瘍に対する斬新な腫瘍溶解療法の臨床開発

2013 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 23240133
• Research Institution: Kyushu University
• Principal Investigator: 谷 憲三朗 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (00183864)
• Project Period (FY): 2011-04-01 – 2015-03-31
• Keywords: コクサッキーウイルスB群3型 / GM-CSF / 腫瘍溶解ウイルス / 医薬品医療機器総合機構 / 一般毒性試 / GMP準拠 / 担癌マウスモデル / ウイルス製造

Outline of Annual Research Achievements

①遺伝子改変CVB3-GM-CSFの作製：昨年度に引き続き抗腫瘍免疫誘導能向上の為のコクサッキーウイルスB群3型（CVB3）の遺伝子改変を行い、昨年度作製したプロテアーゼ切断法よりもさらに高効率な新たなプロテアーゼ切断法を開発、効率良いGM-CSFの発現を可能とした次世代CVB3-GM-CSFを作製した。次に本CVB3-GM-CSFを用いたin vivo抗腫瘍効果を検討し、CVB3-GM-CSF投与群は野生型CVB3治療群と比較して有意に腫瘍の退縮を認め、エンテロウイルスで初の高効率GM-CSF発現ウイルスの開発に成功したことから、新たな腫瘍溶解ウイルスとして期待できる。
②In vivo担癌マウスモデルの作製とin vivo抗腫瘍効果：肺癌以外の癌細胞を用いた担癌マウスモデルの作出に着手し、乳癌細胞及び悪性中皮腫細胞を用いた担癌マウスモデルの樹立に成功した。これらマウスモデルを用いてCVB3-miRTのin vivo抗腫瘍効果を検討し、CVB3-miRT投与群は未投与群と比較して有意に腫瘍の退縮を認めた。
③CVB3-miRTを用いた前臨床試験：医薬品医療機器総合機構からの助言を頂き、当初実施予定であった前臨床研究を一時中断し、臨床試験レベルでの試験物（CVB3-miRT）製造法の確立に努めた。即ちGMP準拠の試薬・機材を用いて、大量製造法をガス透過性バッグを使用した無血清浮遊細胞培養法として開発し、従来のウイルス製造方法の約100倍のウイルス回収を可能とした。また閉鎖系での大量精製法を検討し、ゾーナルロータを用いた密度勾配超遠心法にて大量ウイルスを一度に処理できた。本法によりヒューマンエラーを減らすと共に、前臨床研究に使用可能な力価・品質を確保出来た。当該年度に本製造法にて作製した試験物を用いて、今後品質及び安定性試験、サル・マウスを用いた一般毒性試験を実施予定である。

Research Progress Status

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] A versatile drug delivery system using streptavidin-tagged pegylated liposomes and biotinylated biomaterials. (2013)
  • Author(s): Chen, M-H., Soda Y., Izawa K., Kobayashi S., Tani, K., Maruyama, K., Tojo, A., Asano,S.
  • Journal Title: Int J Pharm Volume: 454 Pages: 478-485
  • DOI: 10.1016/j.ijpharm.2013.06.031
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Inhibition of PTEN tumor suppressor promotes the generation of induced pluripotent stem cells. (2013)
  • Author(s): Liao,J.,Marumoto,T., Yamaguchi, S., Okano, S., Takeda, N., Sakamoto, C., Kawano, H., Nii, T., Miyamoto, S., Nagai, Y., Okada, M., Inoue, H., Kawahara,K., Suzuki, A., Miura, Y., Tani, K.
  • Journal Title: Mol Ther Volume: 21 Pages: 1242-1250
  • DOI: 10.1038/mt.2013.60
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Multimodal immunogenic cancer cell death as a consequence of anticancer cytotoxic treatments. (2013)
  • Author(s): Inoue, H., Tani ,K.
  • Journal Title: Cell Death Differ. Volume: 21 Pages: 39-49
  • DOI: 10.1038/cdd.2013.84
  • Peer Reviewed
• [Presentation] MicroRNA-targeted coxsackievirus B3 infection markedly reduces its toxicity without losing its original oncolytic activity. (2013)
  • Author(s): Shohei Miyamoto, Hiroyuki Inoue, Miyako Sagara, Beibei Wang, Koichi Takayama, Hiroyuki Shimizu, Yoichi Nakanishi, Kenzaburo Tani
  • Organizer: Therapeutics Discovery Symposium Asia Small RNAs to Stem Cells & Epigenetic Reprogramming Asia-2013 Meeting On ‘RNA Regulation to Delivery, Programming to Pluripotency & Therapeutics’
  • Place of Presentation: Tokyo
  • Year and Date: 2013-11-25 – 2013-11-26
• [Presentation] MicroRNA-regulated coxsackievirus B3 abrogates its pathogenicity retaining oncolytic activity. (2013)
  • Author(s): Shohei Miyamoto, Hiroyuki Inoue, Miyako Sagara, Beibei Wang, Koichi Takayama, Hiroyuki Shimizu, Yoichi Nakanishi, Kenzaburo Tani
  • Organizer: The 23rd Hot Spring Harbor International Symposium, Recent Advances in Stem Cell Biology 2013
  • Place of Presentation: Fukuoka
  • Year and Date: 2013-11-04 – 2013-11-06
• [Presentation] Infection with Echovirus 4 elicits potent oncolytic activity against cisplatin-resistant esophageal carcinoma. (2013)
  • Author(s): Hiroyuki Inoue, Keisuke Yasunari, Beibei Wang, Shohei Miyamoto, Koichi Takayama, Yoichi Nakanishi, Kenzaburo Tani
  • Organizer: 第72回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2013-10-03 – 2013-10-05
• [Presentation] CVB3 infection displays different oncolytic activities against cancer stem cells and cancer cells undergoing EMT. (2013)
  • Author(s): Miyako Sagara, Hiroyuki Inoue, Shohei Miyamoto, Chika Sakamoto, Yuki Nakano, Koichi Takayama, Hiroyuki Shimizu, Yoichi Nakanishi, Kenzaburo Tani
  • Organizer: 第72回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2013-10-03 – 2013-10-05
• [Presentation] MicroRNA-targeted coxsackievirus B3 infection markedly reduces its pathogenicity retaining oncolytic activity. (2013)
  • Author(s): Shohei Miyamoto, Hiroyuki Inoue, Miyako Sagara, Beibei Wang, Koichi Takayama, Hiroyuki Shimizu, Yoichi Nakanishi, Kenzaburo Tani
  • Organizer: 第72回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2013-10-03 – 2013-10-05
• [Presentation] Differential susceptibility of cancer stem cells and cancer cells undergoing epithelial-mesenchymal transition to oncolysis by CVB3 infection. (2013)
  • Author(s): Miyako Sagara, Hiroyuki Inoue, Shohei Miyamoto, Chika Sakamoto, Yuki Nakano, Koichi Takayama, Hiroyuki Shimizu, Yoichi Nakanishi, Kenzaburo Tani
  • Organizer: 第19回日本遺伝子治療学会
  • Place of Presentation: 岡山
  • Year and Date: 2013-07-04 – 2013-07-06
• [Presentation] Infection with dual microRNA-targeted coxsackievirus B3 abrogates its pathogenicity retaining oncolytic activity. (2013)
  • Author(s): Shohei Miyamoto, Hiroyuki Inoue, Miyako Sagara, Beibei Wang, Koichi Takayama, Hiroyuki Shimizu, Yoichi Nakanishi, Kenzaburo Tani
  • Organizer: 第19回日本遺伝子治療学会
  • Place of Presentation: 岡山
  • Year and Date: 2013-07-04 – 2013-07-06
• [Presentation] Dual microRNA-regulated oncolytic coxsackievirus B3 infection displays antitumor activity with attenuated pathogenicity in mice. (2013)
  • Author(s): Shohei Miyamoto, Hiroyuki Inoue, Miyako Sagara, Beibei Wang, Koichi Takayama, Hiroyuki Shimizu, Yoichi Nakanishi, Kenzaburo Tani
  • Organizer: The 16th Annual Meeting of American Society of Gene and Cell Therapy
  • Place of Presentation: Salt Lake City, UT
  • Year and Date: 2013-05-15 – 2013-05-18
• [Presentation] CVB3 infection elicits potent oncolytic activity against lung cancer stem cells. (2013)
  • Author(s): Miyako Sagara, Hiroyuki Inoue, Shohei Miyamoto, Chika Sakamoto, Yuki Nakano, Koichi Takayama, Hiroyuki Shimizu Yoichi Nakanishi, Kenzaburo Tani
  • Organizer: The 16th Annual Meeting of American Society of Gene and Cell Therapy.
  • Place of Presentation: Salt Lake City, UT
  • Year and Date: 2013-05-15 – 2013-05-18
• [Presentation] 肺癌幹細胞を標的とした新規遺伝子改変麻疹腫瘍溶解性ウイルス療法 (2013)
  • Author(s): Hiroyuki Inoue, Keisuke Yasunari, Yumiko Matsumura, Kaname Nosaki, Shohei Miyamoto, Koichi Takayama, Yoichi Nakanishi, and Kenzaburo Tani
  • Organizer: 第53回日本呼吸器学会学術講演会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2013-04-19 – 2013-04-21
• [Patent(Industrial Property Rights)] RECOMBINANT COXACKIEVIRUS (2013)
  • Inventor(s): 谷 憲三朗
  • Industrial Property Rights Holder: 谷 憲三朗
  • Industrial Property Rights Type: 特許
  • Industrial Property Number: 61/812943
  • Filing Date: 2013-04-17
  • Overseas