2012 Fiscal Year Annual Research Report
白血病細胞表層癌関連糖鎖抗原に対する一本鎖抗体の開発とオーダーメード治療への応用
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23300356
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
隅田 泰生 鹿児島大学, 理工学研究科, 教授 (70179282)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
若尾 雅広 鹿児島大学, 理工学研究科, 助教 (20404535)
有馬 直道 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (30175997)
伊東 祐二 鹿児島大学, 理工学研究科, 教授 (60223195)
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| Project Period (FY) |
2011-04-01 – 2014-03-31
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| Keywords | 腫瘍マーカー / オーダーメード治療 |
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| Research Abstract |
成人T細胞白血病 (ATL) は、ヒトT 細胞白血病ウイルス1 型 (HTLV-1) が原因で発病する白血病で、日本においては鹿児島県、沖縄県などの南九州を中心に感染者が多い。日本全国にHTLV-1キャリアは約120 万人、ATLの発症率は3～5 ％、毎年約1000人が死亡している。ATLは一度発症するときわめて予後の悪い白血病であり、発症後の生存率は極めて低い。本研究ではATL 細胞表層の糖鎖に着目し、その糖鎖に特異的に結合する一本鎖抗体 (scFv) を調製し、ATL に対するマーカーおよび新規抗がん剤の開発を行うことを目的とした。
ATL患者から樹立したS1T細胞の表層からO型糖鎖を切り出し、BlotGlyco 法によって捕捉、独自開発の蛍光性リンカーで糖鎖を修飾した。3つのフラクションに分画し、各フラクションを、先端を金ナノ粒子で表面修飾した光ファイバーに固定化して、ファイバー型シュガーチップを調製した。このチップを用いて、ヒトB細胞由来のナイーブscFvファージライブラリーからファージのスクリーニング（バイオパニング）を行い、非ATL白血病細胞であるMOLT4 細胞に結合せず、S1T 細胞に強く結合する1クローンのscFvを得た。このscFvは、ATL細胞（MT2、 K3T、 su9T01）に高い結合性があり、非ATL細胞（HL60、 CEM、 Jurkat）では、ほとんど結合性がない、または低かったことから、ATLに優先的に結合していることが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
理由：ファージライブラリーを従来用いていた合成ライブラリーから、健常人の末梢血B細胞から作成したライブラリーに変更したところ、安定性の高いscFvを効率よく得られるようになった。単離精製したscFvは、ATL系の培養細胞に優先的に結合し、非ATL系の白血病細胞由来の培養細胞にはほとんど結合しなかった。しかし、成熟したヒト末梢血PBMCには結合がみられたこと、また単離できたクローンは1つだけであったことから、下述するような工夫を平成25年度は行う。糖鎖の解析は、シュガーチップとコンピューターモデリングを用いて行うことができるようになり、またscFvを固定化した蛍光性ナノ粒子やカーボンナノ粒子の調製法も平成24年度に確立できた。
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| Strategy for Future Research Activity |
上述の問題を解決するために、ヒトB細胞由来のファージライブラリーをまず、健常人PBMCの糖鎖を固定化したチップを用いてネガティブセレクションし、それらに結合しなかったファージをまず選別し、その後確立した方法でscFvを単離する。糖鎖解析や、検査プローブの開発なども行い、最終年度には当初期待した通りの成果を出せるものと考えている。
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[Journal Article] Human IgA-binding peptides selected from random peptide libraries: affinity maturation and application in IgA purification2012
Author(s)
T Hatanaka, S Ohzono, M Park, S Tsukamoto, R Sugita, K Sa-kamoto, H Ishitobi, T Mori, O Ito, K Sorajo, K Sugimura, S Ham, Yuji Ito
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Journal Title
The Journal of biological chemistry
Volume: 287
Pages: 43126-43136
Peer Reviewed
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[Journal Article] Recombinant human soluble thrombomodulin for the treatment of hepatic sinusoidal obstructive syndrome post allogeneic hematopoietic SCT2012
Author(s)
Nakamura D, Yoshimitsu M, Kawada H, Inoue H, Kuroki T, Kaieda T, Fujino S, Hamada H, Suzuki S, Matsushita K, Uozumi K, Arima N
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Journal Title
Bone Marrow Transplantation
Volume: 47
Pages: 463-464
Peer Reviewed
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[Journal Article] High expression of SIRT1, a Longevity gene-encoded protein, and induction of apoptosis by its inhibition in adult T-cell leukemia cells2012
Author(s)
Kozako T, Aikawa A, Shoji T, Fujimoto T, Yoshimitsu M, Shirasawa S, Tanaka H, Honda SI, Shimeno H, Arima N, Soeda S
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Journal Title
Int J Cancer
Volume: 131
Pages: 2044-2955
Peer Reviewed
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[Presentation] Establishment of a BCL2/MYC dual hit lymphoma (DHL) cell line from a patient with B cell lymphoma
Author(s)
Arima N, Yoshimitsu M, Kawada H, Arai A, Nakamura D, Shiraishi M,Hamada H, Suzuki S, Matsushita K, Uozumi K, Arima N
Organizer
74th Annual Meeting of the Japanese Society of Hematology
Place of Presentation
京都
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