2013 Fiscal Year Annual Research Report
低分子化合物を用いるグアニン四重鎖の検出及び結合タンパク質同定法の開発
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23310158
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| Research Institution | Tokyo University of Agriculture and Technology |
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Principal Investigator |
長澤 和夫 東京農工大学, 工学(系)研究科(研究院), 教授 (10247223)
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| Project Period (FY) |
2011-04-01 – 2014-03-31
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| Keywords | グアニン四重鎖 / テロメア / DNAマイクロアレイ / 結合タンパク質 / テロメスタチン / 蛍光プローブ |
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| Research Abstract |
DNAの高次構造であるグアニン四重鎖（G4）は、遺伝子の転写制御に関係し、その探索は新たな創薬標的の発見につながる。我々はこれまで、大環状ポリオキサゾール化合物（6OTD, 7OTD）がG4に強力かつ選択的に結合することを見いだしている。本研究ではOTD類を用いた新規G4形成配列の検出法の開発を行った。
（１）7OTDへ蛍光団を導入した蛍光プローブの合成を行い、DNAマイクロアレイへ応用することで、未同定のG4を検出する手法開発を検討した。7OTDに蛍光団としてCy5を導入し、G4蛍光プローブを合成した。このプローブを用い、DNAマイクロアレイによるハイスループットスクリーニング実験を行った。なおDNAマイクロアレイとして、G4配列が多数存在することが示唆されている領域を含む、CpG islandsマイクロアレイを用いた。その結果、G４を形成する配列として、約２,０００の新規G4配列を同定することができた。
（２）全ゲノムから一挙にG4形成配列を同定する手法を開発することを目的とし、6OTDをビオチン化した新規G4リガンドを開発した。これをアビジンビーズへと結合させ、G4鎖特異的なカラムを作製した。このカラムに対し断片化したゲノムDNAを通すことで、全ゲノムから一挙にG4形成配列を分離することが可能と考えられる。本手法をの予備的実験として、G4形成配列群と非G4形成配列群が混在するDNA混合物を用い、G4カラムを用いた分離実験を行った。その結果、G4形成配列群のみを選択的に分離することができた。今後、全ゲノムを用いて検討を行う。
またグアニン四重鎖に結合するタンパクを同定するためのリガンドとして、6OTDの新規二量体を開発することができた。これが細胞内環境を模倣した、長鎖テロメア四重鎖へ低濃度で相互作用することを見いだした。G4結合タンパク質同定への基盤を構築することができた。
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| Current Status of Research Progress |
Reason
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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Research Products
(35 results)
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[Journal Article] A nonclassical vitamin D receptor pathway suppresses renal fibrosis2013
Author(s)
Ichiaki Ito, Tsuyoshi Waku, Masato Aoki, Rumi Abe, Yu Nagai, Tatsuya Watanabe, Yuka Nakajima, Ichiro Ohkido, Keitaro Yokoyama, Hiroyuki Miyachi, Toshiyuki Shimizu, Akiko Murayama, Hiroyuki Kishimoto, Kazuo Nagasawa
and Junn Yanagisawa
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Journal Title
J. Clin. Invest.
Volume: 123
Pages: 4579-4595
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Synthetic studies on Lymphostin2013
Author(s)
Tatsuya Yamada, Yohei Takayama, Shinya Tatekabe, Kazuo Nagasawa
Organizer
13th International Conference on the Chemistry of Antibiotics and other bioactive compounds (ICCA-13)
Place of Presentation
富士ビューホテル（山梨県）
Year and Date
20130924-20130927
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[Presentation] Total synthesis of (+)-Cylindradine A2013
Author(s)
Makoto Iwata, Kyohei Kanou, Takuya Imaoka, Kazuo Nagasawa
Organizer
13th International Conference on the Chemistry of Antibiotics and other bioactive compounds (ICCA-13)
Place of Presentation
富士ビューホテル（山梨県）
Year and Date
20130924-20130927
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